Acta Clinica Belgica International Journal of Clinical and Laboratory Medicine

ISSN: 1784-3286 (Print) 2295-3337 (Online) Journal homepage: http://www.tandfonline.com/loi/yacb20

Revue Critique Des Examens De Laboratoire Dans Le Diagnostic De La Toxoplasmose S. Stadtsbaeder & N. Gayzal-Michat To cite this article: S. Stadtsbaeder & N. Gayzal-Michat (1975) Revue Critique Des Examens De Laboratoire Dans Le Diagnostic De La Toxoplasmose, Acta Clinica Belgica, 30:2, 83-89, DOI: 10.1080/17843286.1975.11716978 To link to this article: https://doi.org/10.1080/17843286.1975.11716978

Published online: 17 May 2016.

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REVUE CRITIQUE DES EXAMENS DE LABORATOIRE DANS LE DIAGNOSTIC DE LA TOXOPLASMOSE

S. STADTSBAEDER*, N. GAYZAL-MICHAT*

Le diagnostic de Ia toxoplasmose se fait essentiellement par les tests serologiques. La recherche directe des toxoplasmes par examen histologique, par inoculation a !'animal ou sur cultures de tissu peut egalement etre utile dans certains cas. La mise en evidence d'une hypersensibilite a Ia toxoplasmine detecte une infection ancienne et un etat d'immunite de premunition. Nous voudrions discuter ici les divers examens de laboratoire au cours du diagnostic de Ia toxoplasmose, en rappelant les principes techniques, les avantages, les difficultes et !'interpretation de chacun d'eux. Le test de toxop/asmo/yse de Sabin Feldman

reste le test de reference; il est cependant de plus en plus abandonne dans le diagnostic de routine au profit de Ia technique d'immuno.fluorescence indirecte. II est desormais etabli que l'immunofluorescence decele les memes anticorps que le test de lyse et que sa sensibilite et sa speciticite sont equivalentes a celles de Ia toxoplasmolyse. Rappelons ici, rapidement, nos resultats personnels rapportes en 1964. Le tableau 1 montre l'identite des resultats obtenus par immunofluorescence et par toxoplasmolyse. Les quelques discordances se situent aux valeurs de II I0 et restent dans les limites d'imprecision relative des deux methodes. Le tableau 2 detaille les avantages et les inconvenients de !'immunofluorescence. Depuis 1964, Ia technique d'immunofluorescence s'est fort simplifiee: on dispose main tenant de toxoplasmes lyophilises fournis par dif• Laboratoire de Bacteriologie-SCrologie. Clinique universitaire St. Pierre, Brusselsestraat 69, 3000 Leuven.

ferentes firmes commerciales et d'une installation microscopique meilleure et moins couteuse. Plusieurs laboratoires ont deja tente une automatisation totale. Tableau 1 Toxoplasmolyse et immunofluorescence Tests concordants

Tests discordants

(-)1/10 + 1/ 10, 1/ 100 + 1/ 1000 > 1/1000

129 203 5 30

17

Total

367

17

Tableau 2 Test d'IF compare au test de lyse Toxos tues , conserves a - 20°. Pas de facteur accessoi re. Lecture plus rapide. Reproductibilite.

Avantages:

I. 2. 3. 4.

I nconvcnients :

I. Necessite de serum fluorescent ct installation UV. 2. Manipulations plus tongues.

II est bien entendu toutefois que !'immunofluorescence reste delicate et demande un bon entrainement; les causes d'erreur peuvent etre diverses, nous en rappelons quelques unes : I) Ia suspension de toxoplasmes doit etre bien dense, homogene, et les parasites doivent avoir garde leur morpho Iogie caracteristique; les sus penActa C/inica Belgica. 30, 2 (19 75)

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sions commerciales n'ont pas toutes Ia meme qualite a cet egard; 2) l'antiglobuline flu orescente n'a pas toujours Ia meme sensibilite selon les lots, elle doit etre reg ulierement controlee par rapport aux serums standard ; 3) le contre-colora nt avec les toxoplas mes lyophilises est habi tuellement le bleu d'Evans a 1I 10 000 ; Ia rhodamine ne donne pas un co ntras te suffisant avec les preparations du commerce; 4) le systeme optique est tres im portant. II faut rechercher un max imum de sensibilite, etant bien entendu que les flu orescences limites sont peu brillantes . Les nouveaux microscopes a lumiere reflechie donnent une meilleure luminosite que les microscopes class iques a lumiere transmise. De plus, !'introduction des filtres interferentiels (KP 500) assurent une selection particulierement etroite des rayons d'excitation ; 5) Ia lecture est fac ilitee par le contre colorant qui , en principe, masque toute flu orescence non specifique. Le contour doit etre flu orescent dans sa totalite; Ia fluorescence des extremites n'est pas speci tique. Toutefois, Ia limite de visibilite du contour flu orescent peut preter a discussion . Afin d'assurer une meilleure concordance des resultats entre les differents laboratoires, !'OMS a recommande, il y a quelques annees , de standardiser les serums de reference et de convertir les valeurs obtenues en Unites Intern ationales (UI). Les differences de sensibilites entre les laboratoires sont ainsi corrigees et les resultats sont, en principe, mieux comparables. Soit, par exemple, un laboratoire dont le titre limite du serum standard serait I 15 UJ; les taux retrou ves seraient convertis en UI dans un rapport de I 15 ;1/1000 = 200 Unites Internationales . Un autre laboratoire, ayant une sensibilite de 1I 4 UI , devrait cortiger ses dilutions dans un rapport de I14; 1/1000 = 250 UI. II est certainement souhai table que !'i ntroduction des UI se fasse rapi dement dans nos laboratoires. Comment evoluent les anticorps au cours de Ia toxoplas mose? Les anticorps mis en evidence par le test de lyse ou d'immunofluorescence s'elevent pendant 2 mois, persistent a des taux eleves pendant plusieurs mois (6 mois ou plus) puis diminuent progressivement , plus ou moins lentement selon les cas. On sait que les taux peuActa Cllnica Belgica, 30, 2 (1975)

DIAGNOSTIC DE LA TOXOPLASMOSE

ve nt restereleves parfois penda nt des annees, en particul ie r chez les sujets ayant fa it une toxoplasmose cl iniq uement evidente. II est done difficile d'etablir le di ag nostic d' une in fec tion aig ue, re lati ve ment recente, sur Ia base de i'jmmunofluorescence. En pratique, on considere que des taux de 1/2000 ou plus doivent etre rat taches a une in fec ti on evoluti ve plus ou moins recente et que lcs taux de I I 1000 ou moins signent une toxoplas mose ancienne ou au contraire tres recente. Mais, une telle interpretation peut en trainer des erreurs; en cas de doute, on refera une nouvelle determination 3 semaines apres le premier test. A ce moment , une eventuelle denivellation du taux des anticorps permettra de preciser le diag nostic. En Unites Intern ationales, les valeurs max ima d'anticorps sont , selon Desmonts, de 4000 a 2000 UI. Cet auteur ad met que 300 Ulml represente le minimum compatible avec une • infection recente. Que faire lorsqu' il est indispensable de poser d'urge nce un di ag nostic de toxoplas mose recente soit au cours d'une grossesse, soit chez un nouvea u-ne? La mise en evidence d'anticorps appartenant a Ia classe IgM, c'est-a-dire d'anticorps secretes en debut d' immunisation , est utile mais risque de preter a des erreurs. En part iculier, le test de Remington peut donner des reactions soit faussement positives, soit faussement negatives . On pretere encore se referer aux titres des anticorps totaux, considerant que le risque de contamination fretale est d'autant plus grand que le taux des anticorps maternels et fretaux est plus eleve. (tableau 3, d'apres Des monts). On sera prudent done dans !' interpretation du test de Remington sachant , en particulier, que T abl eau 3 Correia!ion en/ re lcs ant !corps et Ia toxop/asl/lose congr!ni tale chez le IIouu·au-nd A nti corps 2400 U / ml 1200 U/ ml 600 a 300 U/ m l 150 U / ml

l nf~ c tion

Presqu e c~rtainc Prescmc dan s 50 o;., uc s cas Ra re Exceptionnc ll c

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DIAGNOSTIC DE LA TOXOPLASMOSE

le test peut rester negatif chez des enfants atteints de toxoplasmose congenitale. II est probable que !'elaboration d'anticorps chez le fretus n'est pas constante d'un cas a !'autre. C'est essentiellement !'evolution du taux des anticorps apres Ia naissance qui permettra d'etablir s'il y a ou non infection evolutive chez !'enfant. A Ia naissance, les anticorps de !'enfant peuvent etre eleves (anticorps passifs), sans qu'il ait necessaireinent une toxoplasmose congenitale; on peut me me observer des taux plus eleves chez !'enfant que chez Ia mere, par simple phenomene d'hemoconcentration. Au cours des deux premiers mois, on peut accuser une chute des anticorps, sans pouvoir pour autant exclure le risque d'une toxoplasmose congenitale; ce n'est que si Ia chute se maintient regulierement apres de nombreux mois que !'on pourra considerer !'enfant indemne. On peut observer, en effet, une chute puis une remontee des anticorps vers les 4e-6e mois, signant ainsi une toxoplasmose evolutive. II est done tres important de suivre

pendant longtemps les anticorps des bebes nes de meres ayant fait une toxoplasmose au cours de leur grossesse . Chez les bebes traites des Ia naissance, les anticorps seront con troles pendant plus d'un an. Avant de terminer !'etude des anticorps lytiques ou marques par immunofluorescence, disons que le marquage des anticorps par Ia peroxydase a deja donne de bons resultats dans quelques laboratoires et qu'il est possible que Ia reaction d'immunofluorescence indirecte soit appelee a etre remplacee par Ia technique a Ia peroxydase; l'avenir devrait nous l'apprendre d'ici peu . La reaction de deviation du complhnent peut se faire soit avec un antigene soluble, soit avec un antigene total de broyats de toxoplasmes. Selon le type d'antigene choisi, les resultats obtenus sont tres differents . L'antigene complet donne des resultats assez comparables aux tests de Sabin Feldman; avec l'antigene soluble, Ia reaction devient positive a partir du deuxieme

lyse ou immunofluorescence hemagglutination 8000 4000 2000

IOOO 400

I

2

6

rr.ois

;ol

I

2

3 4

annees

Fig. 1 - Evolution des anticorps toxoplasmiques deceles par les tests de lyse par/a technique d'hemagg/utination (d 'apres Desmonts, 197 /).

011

d 'immuno.fluorescence er

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mois, elle est beaucoup moins sensible et se negative plus rapidement. Certains estiment que l'antigene soluble est positif se ul ement dans Ia periode aigue d'evolutivite de Ia maladie . Cette reaction reste cependant inco nstante d' un laboratoire a I' autre et, dans un meme laboratoire; selon les lots d'antigene. Elle doit etre interpretee avec prudence. L 'hemagglutination indirecte - La sensibillsation des globules rouges par un antige ne toxoplas mique peut se faire selon differentes modalites. Jacobs et Linda furent les premiers, en 1957, a proposer une fi xation d' un anti gene solu ble - extrait de toxoplasmes lyses a l'eau distillee- sur des globules rou ges de mouton form oles. Les anticorps hemagglutinants so nt differents des anticorps decrits jusqu 'a present : ils apparaissent assez tardivement par rapport aux autres anticorps, ils atteignent un max imum seulement vers le sixieme mois apres !'infection et se maintiennent longtemps a des taux eleves (fig. 1, d'apres Desmonts). Theoriquement done, si Ia methode d'hemagg lutination indirecte etai t bien reproductible, il pourrait etre interessant de Ia prati quer en complement de Ia reaction d'immunoOuorescence atin de reconnaitre les cas recents et les cas plus tardifs: immunoOuorescence elevee sans hemagglutination signifte une toxoplasmose recente, de moins de 6 mois; immunoOuorescence et hemagglutination elevees caracterisent un e toxoplasmose evoluti ve mais d'au moins 6 mois; immunoOuorescence plus ou moins moderee et hemagglutination elevee signent une toxoplasmose chronique d'au moins un an ; immunonuorescence et hemagglutination basses correspondent a une sequelle serologique d'une infection ancienne. Malheureusement, !'hemagglutination est tres differemment interpretee par les auteurs qui Ia pratiquent. La nature de l'antigene utilise est sans doute responsable de ces vari ations. Jusq u 'a present , Ia standardisation de !'hemagglutination indirecte n'est pas suffi sante; Ia reaction doit rester du domaine de !'investigation clinique dans des laboratoires specialises. Acta Clinica Belgica, 30, 2 (19 75)

DIAGNOSTIC DE LA TOXOPLASMOS£

Les tests d 'agglutination des particules de latex sensibilisees par un amige ne soluble toxopl as mi-

que a nt fai tl'objet de co ntrole dans notre laboratoire. Nos premiers res ultats etaient medi ocrement encouragea nts (tableau 4). Dans Ia suite, nos observations ont ete franch ement decevantes: les lots du commerce se sont reveles etre de qu alite tres inegale. Ceci nous a fin alement contraints aabandonner !' utilisation de ce reactif qui- dans tous les cas- ne pourrait jamais etre accepte com me test uniqu e, meme pour un sim ple depistage des cas de toxo pl as mose aigue.

Tablea u 4 Tes t d 'agg!utination pass ire ( lat ex ) 11 °

tes ts

Lut cx

106

'267

I F d iscordan tc ('Yo)

2 1.6

+

5.6

L a reaction d'agglutination directe des toxoplas mes a ete lancee depuis plusieurs mois par un e firm e commerciale. Elle merite d'etre discutee plus en detail. Ce procede, decrit par Fulton en 1959, est un e reaction d'agglutination directe des toxoplasmes formol es mis en presence d'anticorps specifi ques . La titration des anticorps se fai t en micro rvethode, dans des cupul es afond co nique. L'execution de Ia reaction d'agglutination est simple. Nous voul ons cependant souligner qu elques difticultes : I) !'execution correcte des microd ilutions nous parait relativement aleatoire si I' on ne dispose pas d' un appareil a microdilution ; 2) Ia reprodu ctibilite des tests n'est pas ri goure usement absol ue: des ecarts d' une ou deux dilutions sont habituelles d'un jour a !'autre; 3) Ia lecture est relati ve ment facil e, a co ndition de se place r dans de bonnes conditions opti ques: placer un miroir sous les plaques, a plus ou moins 45°, et disposer d' un bon eclai rage.

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L'agglutination des toxoplasmes empeche leur sedimentation dans le fond de Ia cupule et les maintient en une pellicule fine tapissant regulierement Ies parois de Ia cupule. Seules Ies ((crepes)) bien homog€mes et bien etalees doivent etre considerees comme positives. Le phenomene d'agglutinatiOn est mains sensible que Ia lyse ou !'immunofluorescence; les taux d'anticorps seront done plus faibles. La limite de positivite du test est relativement delicate a fixer. Les resultats que nous avons obtenus confirment cette difficulte (Tableau 5). Une limite fixee a1/4 et meme a 1/8 donne plusieurs resultats positifs avec une immunofluorescence negative; une limite fixee a 1/8 entraine aussi des resultats negatifs en agglutination directe et positifs en immunofluorescence.

Tableau 5 Taux limite.\ de JIOii!irilt; en immuno(luoresceltce ( I F) et t'll agg/utinatio11 t!irecte (A D ) AD 1/ 2

I/4

12 6

2

I/X

To tal

2

15

IF -1 / 10 + 1/ 10

9

Les auteurs proposent de fixer a 1/641a limite des reactions faiblement positives eta I /256 celle des reactions fortement positives. L'agglutination est plus influencee par Ies lgM, tandis que Ia lyse ou l'immunofluorescence revelent plus specialement Ies lgG. Cette particularite peut etre interessante Iors du diagnostic d'une infection recente, ou I' on doit s'attendre a retrouver une predominance d'lgM. Dans certains cas, on compare les taux agglutinants avant et apres destruction des lgM par Ie mercaptoethanol: si les anticorps baissent de plus de deux dilutions apres mercapto-ethanol, on conclut a Ia presence d'anticorps lgM. Ce procede n'est cependant pas absolument fidele. Des toxoplasmoses recentes peuvent s'accompagner d'un taux faible d'anticorps agglutinants et, d'autre

par~, certajns malades elaborent des lgM pendant longtemps. Nous avons vu que le test de Remington a !'immunofluorescence n'offrait pas non plus, malheureusement, des garanties absolues. La mise en evidence des anticorps lgM est neanmoins Ia principale indication de Ia reaction d'agglutination directe. L'evolution du taux des anticorps au cours de !'infection est difficile a interpreter: on n'observe pas une courbe bien caracteristique. Les anticorps lgM s'elevent puis sont remplaces par les lgG, mains agglutinants, ce qui entraine une longue evolution en plateau. II n'est pas possible d'etablir le moindre parallelisme entre les taux obtenus par immunofluorescence et par agglutination directe. En conclusion : Ia reaction d'agglutination directe ne peut, aaucun moment, remplacer les reactions classiques de lyse ou d'immunofluorescence. II sera, par contre, interessant de l'associer a!'immunofluorescence pour preciser le diagnos•tic serologique au cours du depistage d'un infection recente. La mise en evidence des toxop/asmes - par l'histologie ou par les isolements en culture de cellules ou encore par inoculation a Ia souris peut etre utile en particulier au cours du diagnostic precoce d'une toxoplasmose congenitale. Certes, Ia presence de toxoplasmes au niveau du placenta n'est pas un signe absolu de toxoplasmose congenitale, mais elle est un element tres important de suspicion. Les inoculations aux souris se font par voie intra-peritoneale et intra-cerebrale; plusieurs passages sont necessaires avant de conclure a un resultat negatif. On comprend qu'il s'agit d'une methode delicate, longue, couteuse, relativement dangereuse, qui ne pourra done etre utilisee qu'exceptionnellement, par des laboratoires specialises. L'hypersensibilite aIa toxop/asmine apparait 2 ou 3 mois apres I' infection; elle est done negative dans Ia toxoplasmose recente. Ceci pourrait etre interessant dans certains cas de diagnostic precoce douteux. Jusqu'ici, cependant, Ia reaction d'hypersensibilite a ete pratiquee seulement dans un but epidemiologique, afin d'etudier le taux d'endemie toxoplasmique de differentes populations humaine ou animale.

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TEMOINS NE GATI FS

SUJETS POSITI FS

TEl'!OINS NEGATIFS

Fig. 2 - Index de migration des leucocytes humains au cours de Ia toxoplasmose (p

In vitro, nous avons pu observer le phenomene d'inhibition de Ia migration des leucocytes humains circulants en presence de toxoplasmine. La figure 2 montre le % moyen de migration des leucocytes chez les sujets negatifs au point de vue anticorps toxoplas miques et une inhibition statistiquement significati ve de Ia Acta Clinica Be/gica, 30. 2 (1 975)

SUJETS POS ITIFS

=0,05).

migration chez les sujets porteurs d'anticorps. Nous n'avons pas observe de difference d' inhibi tion seton le taux d'anticorps circulants. D'autres experiences nous ont montre que, chez Ia souris, !'inhibition de Ia migration des macrophages evoluait parallelement au developpement d'une immunite de premunition.

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KEY WORDS Toxoplasmose - 5erologie de Ia Toxoplasmose - Immunologic clinique.

mentary reaction . It never can be used alone as a rapid detection test. One will always perform first the immunonuorescent reaction or the dye test and , afterw ards, the direct agglutination test, if desired.

RESUME

BIBLIOGRAPHI E

Du poi nt de vue diagnostic clinique de Ia toxoplas mose, seules les reactions de toxoplas molyse ou d'immunonuorescenCe indirecte sont absolument indispensables. Elles ne peuvent etre remplacees par aucun autre test. Parmi les techniques decrites ici, l'une ou !'autre pourrait etre pratiquee en association avec I' IF. Selon les preferences, on choisira soit Ia deviation du complement, so it !'hemagglutination passiveen precisant bien les types d'antigene et de technique choisis - soit encore Ia methode d'agg lutination directe des toxoplas mes. Com me les aut res methodes, !'agglutination directe ne peut etre envisagee que com me une rea.:t ion supplementaire, jamais comme reaction unique de depistage rap ide. On fera toujours d'abord l'immunonuorescence ou Ia lyse et ensuite, si on le desire, une reaction d'agglutination directe. SAM ENV ATTING Voor de klinische diagnose van toxoplas mose zijn aileen nuttig de dye-test en de indirekte immunonuorescentie. Verschillende andere testen k'unnen aan de l.F. worden toegevoegd. zoals CBR, passieve haemagglutinatie - waarbij de gebruikte antigenen moeten worden aa ngegeven of direkte agglutinatie. Ook deze laatste is slechts een bijkomsti ge reaktie, en kan niet gebruikt worden als een snelle opsporingstest. Steeds moeten eerst de dye test of de l.l.F. worden uitgevoerd.

SUMMARY Only the dye test or indirect immunonuorescent reaction are usefulness for clinical di agnosis of toxoplasmosis. They cannot be substitued by any other test. Among the methods described in this paper, each one could be practice in association with the immunonuorescent reaction . One will choice preferably either complement fixing, passive haemaggl utination -by precising the types of antige ns and the method usedor direct agglutinat ion of toxoplas ma. Direct agg lutination, like the other methods, can only be considered as a supple-

DESMONTS, G. - Conge nital toxoplas mosis: problems of early diagnosis . Toxoplasmosis. Ed. D. Hensch, 197 1. p. 137-149. DESMONTS, G. - Some remarks about the Sabin Feldman test and other serological meth ods used in the diagnosis oftoxoplasmosis. Toxop lasmosis. Ed. D. Hemsch. /CJ7!. COUZINEAU , P., BAUFIN E-DUCROCQ H., PELOUX . Y. , DESMONTS, G.- Le serodiagnost ic de Ia toxoplas· mose par agglutination directe. No uv. Press!? Med .. 2. 1604-1 606, 1971 KAUFMAN, G.I.. REM INGTON, J.S, WATERS. H.C.Automation of the indirect fluorescent an tibody test for toxoplas mosis. App/. Microb., 25. 724-730. 1973. NI EL, G., DESMONTS, G., GENTILINI, M. - lmmunonuorescence quantitative et diagnostic serologique de Ia toxoplasmose: introduction des unites internationalcs dans !'express ion des positivites. Parhoi-Biol. . 2 1. 157· 161. 1973. REMINGTON ,J .S. , DESMONTS, G. -Congenital toxoplas· mosis. Variability in the lgM-fl uorescen t anti body res· ponse and some pitfalls in diagnosis. 1. u/Ped .. 27. 27 ·30. 1973. SEPETJIAN, M., THIVOLET, J., LEUNG-TACK . J .. MONIER, J.C. - Le di ag nostic immunologique de Ia syphilis: utilisation d'antiglobulines marquees a Ia peroxydase. No uv. Pri?SSI? MM .. 2. 2277-2279. I973. ST ADTSBAEDER, S., TELLIER-VERHEYDEN , N . WEBER , M. - Diagnostic serologique de Ia toxoplas· mose par immunoflu orescence. ACI. Clin. Bel.~ica, 19. 161-166, 1964. ST ADTSBAEDER , S., PI RET, L., CLOTUCHE, L. - Immu nisation contre Ia toxoplas mose chez Ia so uris. Lyon MM., 225, 175- 177, 1971. ST ADTSBAEDER, S., CALVIN-PREV AL, M.C.- L'asso· ciation trimethoprime-sulfameth oxazole au cours de Ia toxop l as m o~e experimentale chez Ia souris Acr. C/in. Be/g.. p. 34-39, 1973. THOBURN . H.. WILLIAMS, H.- A stable haemagglu tin ating ant igen for detecting toxoplasma antibodies . ./. C/in. Parh. , 25, 762-767, 1972.

Acta C/inica Belgica, 30. 2 (19 75)