914
Methicillin-Resistant
Staphylococcus
aureus
感 染 病 巣 に 対 す る有 機 色 素 剤gentiana violetの
局 所 治 療 剤 と して の 検 討
日本 医 科大 学 付 属第 一 病 院 薬剤 科 佐
Key
治
(平成4年2月13日
受 付)
(平成4年3月5日
受 理)
words:
S. aureus,
要 最 近,熱
守
傷 や 褥 瘡 な どの 皮 膚 病 巣 よ りMRSAが
MRSA,
gentiana
violet
旨 高頻 度 に分離 され て い るが抗 生物 質 に よ る治療 効 果
は 必 ず し も満 足 す べ き もの で は な い.有
機 色 素 剤gentianavioletがMRSA感
て 使 用 で き る 可 能 性 を検 討 す る た め,そ
の 抗 菌 効 果 に つ い て 基 礎 的 な 検 討 を 行 う と共 に 臨 床 的 な 効 果 に
つ い て も 併 せ 検 討 した.そ の 結 果,MRSAを の 最 小 殺 菌 濃 度(minimum 0.0025%∼0.08%を
bactericidal
示 し た.MRSAに
含 むSaureusの
認 め られ ず,持
あ る0.00016%∼0.00063%を
間 で3例
が 除 菌 さ れ,ま
た1例
液 はperml107CFU(107CFU/
下 まで に 殺 菌 す る効 果 を 示 し た.MRSA感
含 む 軟 膏 を 使 用 し た と こ ろ,該 軟 膏 塗 布 後1週 が4週
れ 故gentianavioletはMRSA感
inhibitory
含 む 培 地 に て72時 間 継 続 培 養 して も,菌 の 発 育 は
以 内 で 測 定 限 界(103CFU/ml)以
膚 病 巣 の12症 例 に0.1%gentianavioletを
か っ た.そ
割 合 で 加 え た 場 合 に お い て も,
最 小 発 育 阻 止 濃 度(minimum
続 した 抗 菌 効 果 が 認 め られ た.0.1%gentianaviolet溶
ml)のMRSAを15分
1∼2週
分 離 菌 株 間 で 相 違 は あ る もの の,≦
ヒ ト血 清 を25%の
血 清 非 添 加 時 と比 較 し て 変 動 し な か っ た.gentianavioletの concentration,MIC)で
臨 床 分 離 菌108株 に対 す るgentianaviolet
concentration,MBC)は
対 す るMBCは
染病 巣 の局所 治療 剤 とし
目で 除 菌 さ れ た.全
染皮
間 以 内 で8例,
症 例 に お い て 皮 膚 障 害 は 認 め られ な
染 皮 膚 病 巣 に 有 効 な 治 療 剤 と し て 使 用 で き る も の と思 わ れ
た.
序 Triphylmethane系 violet(pyoktanin ylrosanilin
ブ ドウ球 菌 性 敗 血 症 の 治 療 に 使 用 され て き
文 色 素 剤 に 属 す るgentiana
blue,crystal
chroride)の
violet,meth-
か し,最
gentianavioletの
希i薄溶 液 は グ ラ ム 陽 性 菌
に 対 し,選 択 的 な 殺 菌 効 果 を 示 し1),生 体 組 織 に 対 し て 刺 激 性 が 少 な い こ と か ら,湿
た2)3).し
潤性病 巣の二次
近 の 臨 床 分 離 菌 株 に 対 す る 効果 につ い て の検 討 は ほ とん
ど さ れ て い な い. 著 者 は 臨 床 材 料 よ り 分 離 さ れ たStaphylococcus aureus(S.aureus)108菌
株 に 対 す るgentiana
感 染 防 止 とそ の 乾 燥 化 を 目 的 と し た 薬 剤 と し て 使
violetのin
vitroで
の 殺 菌 効 果 を 検 討 し,
用 さ れ,ま た 抗 生 物 質 が 出 現 す る 以 前 に お い て は,
methicillin-resistant S.aureus(MRSA)に 低 濃 度 で 殺 菌 効 果 の あ る こ と,褥
別 刷 請 求 先:(〒102)東 -5
京 都 千 代 田 区飯 田橋3-5
病 巣 部 に お け るMRSA感
佐治
守
瘡 な い しは 熱 傷
染 に 対 し,本
で あ る こ と が 認 め ら れ た の で,今
日本 医科 大 学 付 属第 一 病 院 薬剤 科
対 し
剤 が有 効
日 まで に得 られ
た 結 果 を 一 括 し て 報 告 す る. 感 染 症 学雑 誌
第66巻
第7号
MRSAに
対 す るgentiana
材 料 と方 法 1)使
violet(pyoktanin
blue,試
薬 特 級,
ら び に そ の 対 照 薬 剤 と し て,
povidone-iodone(Isodine,明
治 製 菓)を 使 用 し た.
用 菌株
1989年5月
915
5)gentiana
和 光 純 薬)な
2)使
効果
た5).
用薬剤
gentiana
violetの
MRSAに
対 す る 最 小 発 育 阻 止 濃 度(minimum
inhibitory
にお け る 日本 医 科 大
concentration;MIC)の
gentiana MBCを
か ら1990年10月
violetとpovidone-iodoneの
測定
violetとpovidone-iodoneのMICと
臨 床 分 離 菌 のMRSA4株
を用 いて比 較
体 培 地 希 釈 法 に よ るMICの
測 定 に
学 付属第一病 院の入院患者 で皮膚感染巣 を持つ患
お い て は 薬 剤 の 色 に よ る 影 響 を 受 け,測
定 が 困難
者 の 病 巣 部 の 膿 な い し は 分 泌 液 を 中 心 に,ま
で あ っ た の で,寒
部 は 喀 疾,咽
た一
頭 粘 膜 な どか ら分 離 した 臨 床 分 離 菌
Saureus,総
計108株
お よ び抗 生 物 質 の 検 定 用 標
検 討 し た.液
わ ち,gentiana
天 平 板 希 釈 法4)6)を 用 い た.す
violet,povidone-iodoneを
れ 秤 量 後,滅
菌 精 製 水 で2倍
準 菌 株 と し て 使 用 さ れ る&aureusATCC6538を
そ の2mlを
対 照 菌 株 と し た.
れ 所 定=濃 度 の 平 板 を 作 り,そ
3)使
用培 地
ラ ー ヒ ン トン 寒 天 培 地(Difco)を
接 種 し,37℃, の発
増 菌 な らび に薬
育 が 見 ら れ な か っ た 最 小 薬 剤 濃 度 をMICと
し
たperml4μg
た 。 ま たMIC測
出培地 として使用
した.
定 後,そ
れ ぞ れ の 薬 剤 の最 小 発 育
阻 止 濃 度 を 含 む 平 板 を72時 間 継 続 培 養 を 行 い,36 時 間,54時
間 お よ び72時 間 後 に お け る 菌 の 発 育 の
有 無 を 経 時 的 に 観 察 し た.
4)gentiana
violetのS.aureus〔MRSAお
よび
methicillin-sensitive S.aureus(MSSA)〕 る 最 小 殺 菌 濃 度(minimum tration:MBC)の
bactericidal
concen-
を 用 い て,液
と臨 床
体 培 地 希 釈 法 に 準 じ て,
測 定 し た4).gentiana
violetを
秤 量 後,極
く 少 量 の 滅-菌 精 製 水 で 完 全 に 溶 解 し,滅 ラ ー ヒ ン トン 液 体 培 地 を 用 い て2倍 れ を 被 験 液 と し た.各
に 接 種 し,37℃,18時
6)0.1%gentianavioletのMRSAに
菌 ミュ
希釈系 列を作
被 験 菌 株 は液 体 培 地
間 培 養 し,そ
の 菌 液 と し た.
0.1%gentianavioletの
たMRSA1株
殺 菌 効 果 を混 釈 培 養 に
実 験 でMICO.000313%を
を 選 び 検 討 し た.こ
ラ ー ヒ ン ト ン 寒 天 培 地 に て,37℃
に 混 和 し て,perm1当
整 し た.0.1%gentianaviolet溶 液0.25m1を
そ れ ぞ れ100μ1を 37℃,18時
採 取 し,寒
間 培 養 後,菌
剤 の 最 小 濃 度 をMBCと iodoneのMRSAに
天 培 地 に 接 種 し て,
の 発 育 の 認 め られ な い 薬 し た.ま
対 す るMBCも
おSaureusをMRSAとMSSAに
る の に 際 し て は,National cal Laboratory 平成4年7月20日
たpovidone同様 に 測 定 し 分類す
Committee
Standards(NCCLS)に
液99.75mlに
加 え,環 境 温 度20℃
で100倍
の 培 養 液 よ り,
な る よ うに 調
間)保 取 し,直
天 培 地 を 流 し 込 み,混 菌 数 を 測 定 し た.殺 2回 行 い,1回
ち,
ち に滅 菌 精 製 水
に 希 釈 し た.希 釈 液 よ り0.2m1ず
シ ャ ー レ に 取 り,そ
菌
で 一 定 時 間(15秒,
30秒,1分,5分,15分,30分,1時 そ の 混 合 液 か ら0.1m1採
間 培 養 後,そ
の 菌 株 を ミュ で 一 晩 培 養 後,
り107CFUに
2倍 希 釈 系 列 の 被 験 液9mlにperm1108colony
を 加 え て,37℃,18時
示 し
発 育 し た-菌 を 白 金 耳 で 採 取 し,生 理 食 塩 水10ml中
formingunit(CFU)の
菌 液lml(108CFU/m1)
対 す る殺
菌 効 果 の 検 討7)
よ り測 定 し,5)の
標 準 菌 株(ATCC6538)1株
分 離 菌108株 MBCを
に対す
測定
Saureusの
た.な
混 釈 し て,そ れ ぞ の 平 板 に 被 験-菌 の18
18時 間 培 養 後 の 菌 の 発 育 の 有 無 を 観 察 し,菌
含 有 す る ミュ ラ ー
ヒ ン トン 寒 天 培 地 をMRSA検
り,こ
普 通 寒 天 培 地18mlに
よび ミュ
剤 感 受 性 測 定 用 培 地 に 使 用 し た.ま のoxacillinと2%のNaClを
それ ぞ
希 釈 系 列 を 作 製 し,
時 間 培 養 液(108CFU/ml)100μ1を
ミ ュ ラ ー ヒ ン ト ソ 液 体 培 地(Difco)お
な
つ2枚
の
れ ぞ れ に ミュ ラ ー ヒン トン寒 釈 培 養 を 行 い48時 間 後 の 生 菌効 果の測定 は同一条件 下で
の 操 作 で2枚
の シ ャ ー レ を 使 用 し,
形 成 さ れ た 集 落 の 平 均 を 求 め,残 存 生 菌 数 と した. 7)gentianavioletのMRSAに
for Clini-
性(MBC)に
準拠 し
MRSAに
対 す る抗 菌 活
及ぼす血 清の影響 対 す るgentianavioletのMBCに
及
佐治
916
ぽ す 血 清 添 加 の 影 響 を非 働 化(56℃,30分)し
た
守 ド,1%四
酸 化 オ ス ミウ ムで 二 重 固 定 し,ア ル コ ー
ヒ ト血 清 を添 加 した 群 と血 清 非 添 加群 に 分 け,被
ル脱 水 後,型
験 菌 と してMRSA3菌
片 を 作 製 し透 過 型 電 子 顕 微 鏡(日 立H-7100)を
CFU/ml存
株 を用 い て,接 種 菌 量107
在 下 で比 較 検 討 した.す
な わ ち,中 試
験 管 に血 清 を そ れ ぞ れ0,1.0,2.5,5.0ml入
れ,
次 い で滅 菌 精 製 水8.0,7.0,5.5,3.0mlと4)の
実
の 如 くエ ポ ン包 埋 を行 い,電 顕 用 切
い てMRSAの 固 定,ア
用
形 態 的 変 化 を観 察 す る と共 に二 重
ル コ ール 脱 水 処 理 ま で上 述 の 方 法 と同 様
なi操作 を行 い,酢 酸 イ ソ ア ミル で 置i換し臨 界 点 乾
験 と同様 な 方 法 で調 製 した 菌 液(108CFU/ml)1ml
燥,金 蒸 着 を 施 し走 査 型 電 子 顕 微 鏡(日 立S-405)
を そ れ ぞ れ に分 注 し,こ れ らの 混 合 液 に滅 菌 精 製
に て 同様 に 菌 体 表 面 の 変 化 を観 察 した.ま
水 を 用 い て 作 製 され たgentiana
菌 株 のMRSA生
釈 系 列 の 溶 液 を1m1ず
violetの2倍
つ 加 え,全 量10ml(最
清 濃 度0,10,25,50%)と な条 件 で 培 養 して,MBCを
し,4)の
希 終血
実 験 と同様
測 定 した.な お 液 体 培
地 希 釈 法 は検 定 薬 剤 の希 釈 に 液 体 培 地 を 使 用 して
菌 を滅 菌 生 理 食 塩 水 で 同様 に
37℃,18時 間培 養 した もの に つ い て も観 察 を行 い, これ を 対 照 と した. 9)対
象症 例
1990年6月
か ら1991年5.月 まで の 日本 医 科 大 学
い るが,本 実 験 に お い て は 培 地 中 に 含 有 す る蛋 白
付 属 第 一 病 院 の 入 院 患 者 でMRSA皮
が 測 定 値 に 影 響 を及 ぼ す こ とを考 慮 して,そ
患12症 例 に つ い て 検 討 した.男 性10例,女
釈 に は滅 菌 精 製 水 を 用 い た.ま 地 で37℃,18時
の希
た 被 験 菌 を液 体 培
間 培 養 を 行 っ た 時 と液 体 培 地 を 滅
菌 精 製 水 で10倍 希 釈 した 培 地 で 同 様 に培 養 した 時
た 同一
膚感 染症 罹 性2例,
年 齢40歳 か ら82歳,平
均66歳 で 術 後 ドレー ン挿 入
部 皮 膚 感 染 創6例,感
染 性 褥 瘡5例,熱
染 性 植 皮 創1例,悪
傷後 の感
性 腫i瘍摘 出部 位 の皮 膚 感 染 創
で は栄 養 条 件 が 多 少 異 な る け れ ど も,菌 の 発 育 に
1例 で あ った.基 礎 疾 患 は 胃癌5例,直
腸 癌2例,
は ほ とん ど差 が認 め られ な か った こ とを 予 備 実 験
膵 臓 癌1例,胆
胱 癌1例,
か ら確 認 した.
熱 傷1例
8)電 子 顕 微 鏡 に よ る形 態 的 変化 の 観 察 0.01%gentianaviolet溶 perml108CFUに
液 にMRSA生
ル タ ール ア ル デ ヒ
癌1例,膀
で あ っ た(Table1).
10)病 巣 部 か らのMRSAの 菌を
な る よ うに接 種 し,37℃,18時
間培 養 後 遠 沈 し,沈 渣 を2.5%グ
管 癌1例,肺
分 離,同
定
病 巣 部 に認 め られ た 化 膿 巣 を 滅 菌 綿 棒 あ る い は 滅 菌 ガ ー ゼ で擦 過 し,病 巣 部 の 膿 や 浸 出 液 の 付 着 した 部 分 の綿 棒 あ る い は ガ ーゼ を切 り出 し,液 体
Table 1 Present status of patients with MRSA infected skin lesions applied the ointment containing 0.1% gentiana violet
1): Wounds are based on the insertion 2): Wounds is based on the metastasis
of the drain. of cancer. 感 染 症学 雑 誌
第66巻
第7号
MRSAに
対 す るgentiana
培 地(チ オ グ リ コ レ ー ト培 地,栄 研)に 採 取 し37℃, 18時 間 増 菌 培 養 を 行 い,こ し,NCCLSに
の 培 養 液 を100μ1採
準 じMRSA検
violetの
Fig.
取
効果
1
Minimum
bactericidal
of
violet
(MBC) The
出 用 寒 天 培 地 に接
11)投
間 培 養 後,菌
の 発 育 を 観 察 し た.
of
与薬 剤の調製
agar
注射 用蒸 留 水
hr
(ワ ッ サ ー フ ー ソ ー,扶
桑 薬 品)に 溶 解 後,水
剤 の マ ク ロ ゴ ー ル 軟 膏(ソ ル ベ ー ス,大 に 練 合 し,全
量100gと
gentianaviolet液 12)除
in at
was
100p1
the
37•Ž,
MSSA
of
of
plate. and
incubated
strains were
for
solution plate
number of
dilution with
(1ml) this
The the
MRSA
two-fold
suspension
that,
Sixty-six
日 本 製 薬)
violet 100mgを
量100mlと
18hr
was
was
at
37•Ž.
mixed
with
incubated
for
was
counted.
of colony
MRSA
of
108CFU/ml
and
42
18
strains
of
tested.
注射 用
し た も の を0.1%
と し た.
菌 効 果 の判 定
対 象 症 例 のMRSA感 gentiana た,皮
violet
concentration against
し て0.1%gentianaviolet
軟 膏 を 調 製 し た.gentiana 蒸 留 水 に 溶 解 し,全
性 基
(9ml)
bacterial
After
gentianaviolet100mgを5mlの
gentiana
solution
genitiana
種 し37℃,18時
917
violet軟
染 皮 膚 病 巣 部 位 に0.1%
膏 を1日1回
単 純 塗 布 し た.ま
膚 損 傷 の 程 度 の 大 き い症 例 に つ い て は軟 膏
塗 布 前 に0.1%gentiana を 施 し た.該
violet溶
軟 膏 塗 布 後,病
液 で患 部 の洗 浄
巣 部 よ り適 時 検 体 を
採 取 し増 菌 培 養 を 行 い,MRSAが
検 出 さ れず 且 つ
37℃,18時
間 培 養 を 行 っ た 後,こ
れ ら4菌
株 を最
次 回 の増 菌 培 養 で も再 検 出 さ れ な い 場 合 を 除 菌 さ
小発 育阻 止濃 度 を含 む培 地 にて 更 に培 養 を継 続
れ た も の と 判 定 し た.塗
し,36時
布 後,MRSAが
陰 性化す
る ま で に 要 し た 日 数 も 測 定 し た. 成 1.基
か っ た.し
臨 床 分 離 株 に 対 し て,gentiana
letは0.0025%濃
た0.08%濃
を 含 むS.aureusの
し た(Fig.1).な
は90 方,povidone-
iodoneのMBCは1%,MICは0.5%を
示 し,4
あ っ た.つ
よ って 褐 色 を呈 して いた 培 地 の 色 調 は 消 失 して い
を 選 び,こ violetと 測 定 し,併 せ
お け る菌 の 発 育 阻 止 作 用 の 持 続 性 に つ 示 す 如 くgentiana
株 と もそ れ ぞ れ 異 な った 値 を
平 成4年7月20日
た.
間 に あ っ た.菌
2)gentianavioletのMRSAに
を接 種 後
対 す る殺 菌 効
果 MRSAの 0.08%濃
全 被 験 菌 株 がgentianavioletの 度 で 殺 菌 さ れ た こ と に よ り,本
へ の 使 用 濃 度 を 考 慮 し て,0.1%=濃 MRSAに
剤 の臨床
度 に お け る
対す る殺菌 力 につ いて経 時 的 に菌数 を
計 算 す る こ と に よ り 検 討 し た.0分 CFU/mlの
し,MBCは0.0025%∼0.02%,MICは
0.00016%∼0.00063%の
間 培 養),4菌
株 と も 菌 の 発 育 が 見 ら れ,povidone-iodoneに
い でMRSA4株
い て も 検 討 し た.Table2で
定後
含 有 し た 培 地 で37℃,18
度 に お い て は
対 す るMBCは
povidone-iodoneのMBCとMICを
対 し て4菌
0.5%povidone-iodoneを
全 被験 株 を殺菌
れ ら の 菌 株 に 対 す るgentiana
示
か し,MRSA-1とMRSA-7の2株
時 間 引 き 続 き 培 養 し た と こ ろ(36時
お 対 象 と し て 用 い たgentiana
violetのS.aureusATCC6538に 0.0025%で
vio-
度 でMSSAの50%,MRSAの
殺 菌 し た.ま
MRSA66株
violetに
の発 育 は観 察 され な
株 間 に 著 明 な 差 は 認 め ら れ な か っ た.MIC測
S.aureusの
てMICに
地 自 体 に はgentianaviolet
時 間 後 に 発 育 が 認 め ら れ た.一
対 す る 抗 菌 活 性
(MBC)
47%を
間 後 に お け る菌 の 発 育
に よ る 着 色 が 認 め ら れ,菌
violetとpovidone-iodoneのS
aureus(MRSA,MSSA)に
間,72時
を 観 察 し た と こ ろ,培
績
礎的検 討
1)gentiana
間,54時
生 菌 数 はgentianavioletの
り時 間 と 共 に 減 少 し,5分
で2.1×107 添 加 に よ
後 に は5.4×104CFU/
佐治
918
守
Table 2 Minimum bactericidal concentration (MBC) and minimum inhibitory concentration (MIC) of both gentiana violet and povidone-iodone against MRSA
Four
strains
broth
of MRSA
dilution
method. the
The
agar
on
counted
2)
of
Fig.
plate
means
time
and that
was
means
clinical MIC
the
was
bacteria
that
povidone-iodone
incubated
determined
by
violet
bacterial
not
grow
incubated
bacteria for
was
the
was
37•Ž
to
18m1
(108CFU/ml)
for
18hr.
The
grew
colony
was
even for
when
if the
agar
>_ 54hr
cultured
plate
(total
on
containing
the
? 72hr).
the
agar
plate
containing
響
下 と な っ た(Table3).
被 験 菌 と し てMRSA3株 及 ぼす血 清 の影
を 選 び,107CFU/ml
の 菌 浮 遊 液 に ヒ ト血 清 を 加 え,こ gentianavioletのMBCを
Table 3 Bactericidal activity violet against MRSA
of was
18hr.
後 に は 測 定 限 界(103CFU/ml)以
3)gentianavioletのMBCに
the
dilution
added
suspension at
by
agar
determined.
did
furthermore
MBC
determined
of gentiana of
plate
MIC
isolates. was
dilution
microlitter and
plate,
violet
from
1 legend).
of two-fold
hundred
agar
time
of
selected
(see (2ml)
agar
gentiana
MIC
were
One
the
the
Duration
the
な り,15分
on
Duration
MIC
mlに
solution
medium.
incubated
1)
method
れ に対 す る
測 定 し た.10%な
い し
of 0.1% getiana Table
4
Influences
bactericidal
of human
effect
whole
of gentiana
serum
violet
on
against
MRSA
Three One
strain
of MRSA
Bacterial saline the
suspension was
added
mixture
After
the
was
0.1%
diluted
to
solution
(0.2m1)
in
The
the
viable
experiments 1)
< 103CFU/ml
were
cells done
of
with
1/4
min was
distilled mixed
incubated bacteria
at
(99.75m1)
(0.1ml)
was
plate
for
triplicate.
isolates.
107CFU/ml
violet
at 20'C
1 : 100
clinical
cotaining
solution
medium
plate.
from
getiana
incubated mixed
diluted
and
selected
(0.25ml) to
was
that,
and
was
were
60 min.
water. with
at
to
37•Ž
in and
picked
the for
counted.
strains
isolates. added
were
Bacterial to
two-fold
each
human
to
The
10%,
25%
and
agar
tion.
Each
48hr,
hundred this
of
plate gentiana
each 50%,
tube
was
(at
56•Ž
tube
in
for the
30min)
on
incubated against
at
for
the
agar
18hr MRSA
whole
final
37•Ž from
at was
serum
37•Ž,
to
0%,
concentra-
for
18hr.
each
tube,
medium
of
more,
became
as the
up
was (1ml)
Further
manner
picked
clinical
solution
violet.
incubated was
from
of 108CFU/ml
the
respectively
inoculated
violet
random
(lml)
gentiana
was
microlitter
was
at
containing
inactivated added
The
tube
dilution
was
up
selected suspension
One
plate. and
and The
MBC
of
determined.
感 染 症 学雑 誌
第66巻
第7号
MRSAに
25%の
対 す るgentianavioletの
血 清 濃 度 の 場 合 に は血 清 非 添 加 時 と同 様 な
MBCを
示 し た が,50%血
gentiana
清 濃 度 に した 時 に は
violetのMBCは1/2か
ら1/4に 減 少 し,
血 清 に よ る 影 響 が 認 め ら れ た(Table4). 4)電
Photo.
効果
2
A:
MRSA
tion
for
Scanning
electronmicroscope
was 18hr
incubated 37•Ž.
919
incubated at
with
37•Ž.
with
findings 0.85%saline
(•~7,500)
0.01%gentiana
B: violet
solu-
MRSA for
was l8hr
at
(•~10,000)
子 顕 微 鏡 に よ る形 態 的 変 化
0.01%gentiana
violet溶
養 し て 得 ら れ た 菌 体(死
液 中 で37℃,18時
菌)と,対
てgentiana
vioiet処
増 加 し,ま
た繭
A
照 と し て滅 菌
生 理 食 塩 水 中 で 培 養 し て 得 ら れ た 菌 体(生 電 顕 像 を 観 察 す る と,透
間培
菌)の
過 型 電 顕 で は 対 照 に比 べ
理菌 体 の細胞 内 電子 密度 は
して い る像 槻
察 さ れ た(photo
1).走 査 型 電 顕 で も 対 照 に 比 しgentiana 理 の 菌 体 は 形 態 が 損 な わ れ,不
violet処
定 形 な形 状 を 示 す
像 が 随 所 に 観 察 さ れ た(photo2). II.臨
床的検討
Table1に
示 し た 疾 患 に お け るMRSA感
染巣
B Photo.
1
Transmission
electronmicroscope
findings A:
MRSA
tion
for
incubated 37•Ž.
was 18hr with
incubated at
37t.
with (x50,000)
0.01%gentiana
0.85%saline B: violet
solu-
MRSA for
was 18hr
at
(•~ 50,000)
A
か ら のgentianaviolet軟 を 検 討 し た.12症
例 中 塗 布 後,1週
さ れ た も の8例(症 10,11),1∼2週
B
た4週
あ っ た.こ
て もMRSAは
例3,4,9)
目 で 除 菌 さ れ た も の1例 れ らの 症 例 で は 再 検 に お い
検 出 さ れ な か っ た. 考
最 近,熱
間以内で除菌
例1,2,5,6,7,8, 間 以 内 で3例(症
に 認 め られ た,ま (症 例12)で
膏 塗 布 に よる除菌 効果
察
傷 や 褥 瘡 な ど の 皮 膚 病 巣 よ りMRSA
が 高 頻 度 に 分 離 さ れ て お り8)∼10)抗生 物 質 に よ る 治 療 効 果 は 必 ず し も満 足 す べ き も の で は な い 。 ま た mitomycinのwet
dressingをMRSA感
染 褥 瘡
な ど の 局 所 治 療 に 使 用 し有 効 で あ っ た と の 報 告11) 平成4年7月20日
佐治
920
もあ る.一 方,povidone-iodoneはMRSAに て 有 効 な生 体 消 毒 剤(antiseptic)と
対し し て,消 毒 の
守 合 に お い て も,血 値 を 示 し た.さ
み な らず 治 療 を も 兼 ね て 広 く使 用 さ れ て い る.
地 に て72時
Haleyら12)はMRSAに
れ ず,培
対 す るpovidone-iodone
の 殺 菌 効 果 を 検 討 し,0.01%∼1%溶 0.001%溶
液 で30秒,
液 で も1分 で死 滅 す る こ とを 報 告 した.
清 非 添 加 時 と比 較 し て 変 わ ら ぬ ら に,最
小 発 育 阻 止濃 度 を含 む 培
間 継 続 培 養 し て も,菌
の発育 は認め ら
地 中 に な お 紫 色 の 色 素 が 残 存 し,こ
の こ
と は キ ノ イ ド型 の 発 色 団 で あ るgentina (吸 光 度591ηm)が
violet
不 活 化 され ず に 存 在 して い る
ま たMycock13)はpovidone-iodoneのMRSAに
こ と を 示 唆 し て お り,そ
対 す るMICは0.25%∼0.5%の
が 認 め ら れ た も の と 思 わ れ る.gentianavioletと
間 にある ことを
示 した.し か しLarson14)はpovidone-iodoneは
皮
povidone-iodoneのMRSAに
対 す る抗菌 活 性 を
膚 に塗 布 後 持 続 した 抗 菌 効 果 は な く,血 液 や 喀 疾
比 較 す る と,被
な どの 生 体 成 分 存 在 下 で そ の 効 果 はす み や か に減
iodoneはMBCが1%,MICが0.5%と
弱 す る と し て い る.ま iodoneに5%ウ 用 させ,そ
た 辻 ら14)はpovidone-
マ血 清 存 在 下 で 菌 を 一 定 時 間 作
の殺 菌 効 果 を検 討 した と こ ろ,血 清 非
添 加 時 と比 べ1/16∼1/32に し て い る.小
効 果 が減 弱 す る と報 告
林 ら15)によ れ ば,MRSAは0.1%
povidone-iodoneを30秒
∼1分
に よ り死 滅 す るが,2%乾
験 菌4株
に お い てpovidoneほぼ一定
の 値 を 示 す が,gentiana
violetで
で あ り,4株 iodoneと
と も 異 な っ た 値 を 示 し,povidone-
比 較 す る と,MBCとMICに
著 しい 相
違 が 見 ら れ,povidone-iodoneに
間 作 用 させ る こ と
燥 酵 母 存 在 下 で は60分
ま た,gentiana
violetで
床 上 生 体 成 分 が 存 在 す る場 合,十
増 加 が 見 ら れ,走
分 な注 意 が 必 要
れ,不
高 濃 度 の 生 体 消 毒 剤 は 殺 菌 効 果 と共 に生 体 組 織 に も何 らか の 細 胞 傷 害 性 を示 し,肉 芽 形 成 を 抑 制 す る可 能 性 も あ る.生 体 消 毒 剤 を 局 所 の 治療 を 目 時 間 で の 殺 菌 効 果 と共 に
比 し よ り低 濃 度
で 効 果 を 発 揮 す る よ う に 思 わ れ た.
過 型 電 顕 に お い て,溶
と した.
はMBCが
0.0025%∼0.02%,MICが0.00016%∼0.00063%
の 処 理 に お い て も,生 存 が 見 られ た こ とか ら,臨
的 し て使 用 す る場 合,短
れ故 に持続 した抗菌効果
処 理 し たMRSAは
透
菌 や細胞質 内の電子密 度 の
査 電 顕 で は球 状 の 形 態 が 損 なわ
定 形 の 形 態 が 観 察 さ れ た.こ
れ らの形 態 的
所 見 は 菌 の 死 滅 に 関 連 し て い る 可 能 性-が推 測 さ れ た. こ の よ う にgentiana
violetはMRSAに
て,povidone-iodoneよ
対 し
り強 力 な 殺 菌 効 果 を 示 し,
病 巣 か らの 浸 出液 に よ っ て不 活 化 され な い こ と,
病 巣 か ら の 浸 出 液 で 効 果 が 減 弱 さ れ に く く,MIC
持 続 した 抗 菌 効 果 を 持 つ こ とが 必 要 で あ る と思 わ
以 上 の 濃 度 を 病 巣 部 で 維 持 で き れ ぽ,持
れ る. 一般 に 有 機 色 素 剤 の抗 菌 作 用 は深 達 性 で 血 清 蛋
菌 効 果 を 発 揮 す る こ と が 期 待 さ れ,低
白 の存 在 に よ って もそ の 作 用 の 減 弱 が 少 な く,更
は 従 来 皮 膚 刺 激 が な い と さ れ て き た が,湖
に収 敏 作 用 と生 体 組 織 に対 す る刺 激 性 が 少 な い な
に よ れ ば,皮
どの特=徴を 有 す る.著 者 はgentiana
レ ル ギ ー に よ る 作 用 で な く,高
濃度 での使用 に よ
ム陽 性 菌 に選 択 的 殺 菌 作 用 を 持 つ こ とか ら,本 剤
る 一 次 刺 激 作 用 で あ り,そ
の 安 全 域 濃 度 は
がMRSA感
gentianaviolet含
violetが グ ラ
染 病 巣 の 局 所 治 療 剤 と して 使 用 出来
続 した 抗 濃 度で の臨
床 使 用 が 可 能 で あ る と 思 わ れ る.gentianaviolet
膚 刺 激 は 存 在 し,そ
山 ら17)
の発 生 機 序 は ア
油 性 軟 膏 で0.1%,そ
の水溶 液
る可 能 性 を 検 討 す るた め,そ の 抗 菌 効 果 につ い て
で 皮 膚 に お い て は0.5%,口
腔 粘 膜 で は0.2%
の基 礎 的 な検 討 を 行 う と共 に 臨 床 的 な 効 果 に つ い
∼0 .3%で
者 は0.1%gentiana
て も検 討 した.iN
violet溶
ameusの
oitroに お い て,MRSAを
臨 床 分離 株(総
相 違 は あ る もの の,MBCは を示 した.ま たgentiana るMBCは
計108株)は
含む 菌株 間で S.
≦0.0025%∼0.08% violetのMRSAに
健 常 ヒ ト血 清 を25%の
あ る と し て い る.著
液 が107CFU/mlのMRSAを15分
で 測 定 限 界(103CFU/ml)以
以 内
下 ま で 殺 菌す る こ と
を 認 め た の で,そ の 臨 床 使 用 濃 度 を ひ と ま ず0.1%
対す
割合 で加 えた場
と し,病
巣 か ら の 浸 出 液 の 吸 収 とgentianaviolet
が 必 要 以 上 の 高 濃 度 で 病 巣 患 部 に 貯 留 させ な い こ 感 染 症学 雑 誌
第66巻
第7号
MRSAに
対 す るgentiana
violetの
とを 目的 と して,水 溶 液 性 基 剤 で あ る マ ク ロ ゴ ー ル 軟 膏 を 選 択 し,0.1%gentianaviolet軟 製 し た.該 軟 膏 を12症 例 のMRSA感
膏 を調
の 単 純 塗 布 を 施 行 した 所,12症
例 中塗
布 後1週
間 以 内 で 除 菌 され た もの8例,1∼2週
以 内 で3例 に 認 め られ,ま た4週
目で 除 菌 され た
も の1例 で あ った.症
著 効 を示 し,症
例5は
例5と10は
基礎 疾 患 に体 表 の 約60%が
熱 傷(第III度)
921
habior of bacteia toward gentiana Exp. Med., 33: 569-586, 1921. 2)
染 皮 膚病 巣
に1日1回
効果
日 本 公 定 書 協 会:
塩 化 メ チ ル ロザ ニ リ ン.日
局 方 注 解 第 一 部(第7改
本薬
南 江 堂,
4)
局 方 解 説 書, p.327-330, 五 島 瑳 智 子, 金 子 康 子:
5)
検 査, 27: 1397-1405, 1983. 菅 野 治 重: 細 菌 検 査 に お け るMRSAの
6)
準. 最 新 医 学, 44: 2510-2514, 1989. 五 島 瑳 智 子, 徐 慶 一 郎, 河 喜 多 龍 祥, 小 酒 井 望,
塩 化 メ チ ル ロザ リニ ン.
抗 生 物 質 に よ る全 身 投 与 が で き な い状 態 に あ った
発 育 阻 止 濃 度(MIC)測
皮 膚 病 変 よ り陰
p.217-222,
東 京, 1965. 日 本 公 定 書 協 会:
三橋
でMRSAは
正),
J.
3)
に侵 され,植 皮 後,加 療 中 に ネ フ ロ ーゼ を 併 発 し, が,軟 膏 塗 布 後2日
violet.
7)
進,
西 野 武 志,
8)
大 沢 伸 孝,
田波
判 定 基
洋:
最小
定 再 改 訂 に つ い て.
Chemotherapy, 29: 76-79, 1981. 島 田 慈 彦: 繁 用 消 毒 剤 の 実 験 的 条 件 下 に お け る 殺 菌 力 の 検 討.
性 化 した.症 例10は 基 礎 疾 患 が 膀 胱 癌 で あ り,転
日本薬
廣 川 書 店, 東 京, 1986. 薬 剤 感 受 性 測 定 法. 臨 床
北 里 医 学,
512-525,
移 に よ る会 陰 部 か ら陰 嚢 に わ た る皮 膚 悪 性 腫 瘍 摘
真 志,
田 口幹 雄,
出後 の 感 染 創 で あ った が,皮 膚 刺 激 作 用 を 認 め ら
高橋
淳,
れ る こ と も な く,軟 膏 塗 布 後4日
木 寛, ム バ キ.ン バ ア ラ, 渡 辺 貴 和 雄: 老 人 病 院 に お け る 細 菌 性 肺 炎 と褥 瘡 感 染 の 起 炎 菌 に 関 す る
陰 性 化 し て い る.ま た 症 例12は 基 礎 疾 患 が 胃癌 で あ り,右 下 肢 部 の 感 染 性褥 瘡-(第IV度)の 損 傷 程 度 は 大 き く,0.1%gentiana
violet溶 液 で
洗 浄 後,軟 膏 を 塗 布 した.塗 布 後,経
時 的 に病 巣
部 よ り菌 量 の 減 少 が 見 られ た が,MRSAを 除 菌 す る の に28日 間 を要 した.全 検 で もMRSAは gentiana
皮膚 の
完全 に
症例 において再
認 め ら れ ず,最
長1ヵ
月間
violet軟 膏 を 塗 布 し続 け た 症 例 を 含 め
て,す べ て の症 例 に皮 膚 傷 害 は 認 め られ な か っ た. 従 っ てgentiana
violetは 安 価 で 入 手 し易 く,軟 膏
製 剤 と して 調 製 も容 易 で あ る こ とか ら,MRSA感 染 皮 膚 病 巣 に対 し有 効 な治 療 剤 と し て使 用 で き る も の と思 わ れ る. 謝辞:稿 を終 えるに当た り,御 指導 ・御校閲を賜 った 日 本医科大学第2内 科学教室赫
彰郎教授 に深謝する と共に
本研究に貴重 な御助言 を頂戴 した同老人病研究所免疫部門 大 国寿士教授,同 第2内 科葉山修陽博士,同 第2外 科内山 喜一郎博士,同 皮膚科星
文 献 1) Churchman, J. W.: Further studies on the be-
平 成4年7月20日
吉 田 俊 昭,
坂本
靖,
山本
隆 杉 正 和,
屋 富 祖 夏 樹,
鈴
内 感 染 菌 と し て のMRSA-.
T.
J.: Properties of methicillin-resitant Staphylococuss aureus colonizing patients in a burns unit. J. Hosp. Infect., 7: 137-148, 1986. 10) Boyce, J. M., White, R. L., Causey, W. A. & William, W. R.: Burn units as a source of methicillin-resistant Staphylococuss aureus infections. J. A. M. A., 27: 2803-2807, 1983. 11)
石 橋 経 久, 富 永 雄 幸, 松 尾 啓 左: に 対 す る 当 院 の 治 療 対 策.
MRSA院
感 染 症 誌,
内 感染 3: 53, 1990.
12) Haley, C. E., Cason, M.M., Smith, J.W., Ludy, J. P. & Mackowiak, P. A.: Bactericidal activity of antiseptic aginst methicillin resistant Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 21: 991 -992
, 1985.
13) Mycock, G.: Methicillen/antisepticresistant Staphylococuss aureus. Lancet, 26: 949-950, 1985. 14) Larson, E.: Guideline for topical antimicrobial agents. Am. J. Infect. Control, 16: 253 -265 15)
辻
, 1988. 明 良, 関 口金 雄,
川 崎 賢 二,
小川
各 種 消 毒 薬 の 作 用 濃 度,
作用
時 間 お よ び 血 清 添 加 に よ る 殺 菌 効 果 の 変 動.
感染
正 俊,
16)
五 島 瑳 智 子:
金 子 康 子,
症 誌, 53: 292-303, 1979. 小 林 寛 伊,都 築 正 和, 細 渕 和 茂 ニメ チ シ リ ン耐 性 黄 色 ブ ドウ 球 菌 に 対 す る 消 毒 剤 の 効 果. 手 術 医 学, 8: 477-480, 1986.
申 し上げ ます. 尚,本 論文の要 旨は 日本薬学会第110年会(1990,札 幌),
大石和徳
宇 塚 良 夫,
Chemotherapy, 34: 240-249, 1986. 9) Lacey, R. W., Barr, K. W., Barr, V. E. & Inglis,
御協力頂いた同付属第一病院中央検査室 ・細菌部門,中 央
第90回 日本皮膚科学会総会(1991,京 都)に おいて発表 し た一
力 富 直 人,
検 討(第1報)-院
健二博士 に感謝致 します.ま た
研究室 ・電子顕微鏡部門ならびに薬剤科の皆様 に厚 く御礼
宍 戸 春 美,
1982.
毅,
目 にMRSAは
松 本 慶 蔵,
12:
永武
17)
湖 山 里 美,
高木
修,
岩崎
隆,
服 部 怜 美,
光 芳:ピ オ ク タ ニ ン に よ る 皮 膚 障 害. 17: 385-389, 1975.
本田
皮 膚 臨 床,
佐治
922
守
Effect of Gentiana Violet against Methicillin-Resistant Staphylococcusaureus (MRSA) Mamoru SAJI Sectionof Pharmaceutics,the First Hospitalof NipponMedicalSchool The
bactericidal
studied
both 1)
and
2) within
and
and
MBC
The
number by
under
3)
infected
The
not
of cells
the
were
an
skin
lesions,
The
side
against
violet
MRSA
in
medium
(MIC)
for
72
was hr
containing was
of gentiana human
in
isolated
the
from
clinical
specimens
was
follows: violet
to MRSA
whole
serum
which
medium
as
was
exists
decreased the
final
between in
the
0.0025% medium.
to 5.4 •~
104
CFU/ml
concentration,
and
also
later.
activity
medium
as
if 25%
107 CFU/ml
concentration
ointment
are
(MBC)
2.1 •~
15 min
MRSA
obtained
even
gentiana
inhibitory
in the
using
violet results
influenced
0.1%
inhibitory and
bacteria By
gentiana
concentration
was
existing
Minimum
the
of vivo.
103 CFU/ml
0.00063%,
4)
in
bactericidal the
5 min
decreased
with
effect
vitro
Minimum
0.08%
and
in
not
of gentiana
violet
influenced
even
to
MRSA
was
if gentiana
between
violet
0.00015%
was
incubated
at 37•Ž. 0.1%
eliminated
gentiana
violet
to
completely
from
the
12
cases
of patients
infected
areas
of
with the
the
skin
MRSA
within
4
weeks. 5) ointment It lesions
effects
containing is
suggested
infected
of
gentiana
gentiana that with
gentiana
violet
were
not
observed
in
all
cases
during
the
use
of
the
violet. violet
may
be one
of
the
useful
drugs
for
the
treatment
of
the
skin
MRSA.
感染症学雑誌
第66巻 第7号