1075

ELISAを

用 いた 風疹IgG・IgM抗

体 の平 行 線 定量 法 に よ る解析

北里研究所病院研究部 森













北里研究所研究部 鈴









群馬大学医学部衛生学 星







(平成4年2月28日 受付) (平成4年4月10日 受理)

Key

words:

ELISA,

parallel

rubella

antibodies,

要 平 行 線 定 量 法 を 用 い たELISAで IgG・ELISAに

line assay

method,

relative

potency



風 疹 抗 体 を 測 定 し,相 対 力 価 とHI価

お け る 平 行 線 定 量 法 は,標

標 準 血 清 に 対 して 平 行 性 を 示 した.し

と の 比 較 検 討 を 行 った.

準 血 清 お よ び 被 検 血 清 に お い て 直 線 性 を 示 し,被 検 血 清 は

か し,IgM捕

捉ELISAで

違 い に よ っ て 用 量 反 応 回 帰 直 線 の パ タ ー ン が 違 うた め,被

の 風 疹IgM抗

体 陽 性 血 清 は,抗 体 量 の

検 血 清 の 希 釈 倍 数 の 範 囲 を 高 め に 変 更 す る必

要 が あ った. 風 疹IgG抗

体 の 相 対 力 価 とHI抗

体 価 の 比 較 に お い て 相 関 性(相 関 係 数0.781)が

認 め られ た.ま

た,

相 対 力 価 で表 す こ とで 変 動 係 数 の 小 さ い 結 果 が 得 ら れ た. 平 行 線 定 量 法 を 用 い たELISAに

よ っ て 得 られ る 相 対 力 価 は,風

疹 感 染 者 とMMRワ

ク チ ン被 接 種 者

の 経 時 的 抗 体 価 の 変 動 を 良 く反 映 し て い た. 以 上 よ り平 行 線 定 量 法 を 応 用 し たELISAに

よ る 抗 体 測 定 は,抗

体 保有 状 況 の指 標 として有 用 な方 法

で あ る こ とが 示 唆 さ れ た.



現 在 風 疹 抗 体 価 の 測 定 方 法 と して 最 も普 及 し て



風 疹 は,特 有 の 発 疹 ・ リンパ 節 の腫 脹 お よ び軽

い る の は,赤 血 球 凝 集 抑 制 試 験(Hemagglutina-

微 な発 熱 を 主 症 状 とす る小 児 に好 発 す る急 性 の発

tion Inhibition,HI)で

疹 性 疾 患 で あ る.し か し,妊 娠 早 期 に 感 受 性 の あ

清(ペ ァ血 清)を 用 い てHI抗

る妊 婦 が 風 疹 に 罹 患 す る と生 まれ て く る子 供 に先

れ れ ば,ご

天 性 の 奇 形(先

天 性 風 疹 症 候 群)を

生 ず る こ とが

あ る.急 性 期 と回復 期 血 体価 の上昇 が確認 さ

く最 近 感 染 した と判 定 され る.

しか し,急 性 時期 の 採 血 が遅 れ た り,ま た ペ ア 血 清 の採 血 が で きな か った り して 確 実 な診 断 が 困

高 頻 度 に み られ る. 風 疹 の 抗 体 検 査 は,発 疹 性 疾 患 の鑑 別 に用 い ら

難 な場 合 が 多 い.そ こで,単 一 血 清 で 風 疹IgM抗

れ る だ け で は な く,妊 婦 の 人 工 流 産 中 絶 の 適 応 に

体 を証 明 す る こ とが で きれ ぽ,診 断 の有 力 な 助 け

対 して も重 要 性 が あ る.さ

とな る1)2).

ら に,ワ ク チ ン接 種 後

の効 果 判 定 に も用 い られ て い る. 別 刷 請 求 先:(〒108)港

区 白金5-9-1

北 里 研 究所 病 院 研 究部 平 成4年8月20日

近 年,ELISAに

よ る 風 疹IgG抗

体 と風 疹IgM

抗 体 の 測 定 法 が 開 発 され て きた.し か し,実 際 の 森田



診 断 に 用 い られ て い る各 商 業 検 査 施 設 の報 告 と臨

森田

1076

床 所 見 と の 不 一 致 が,時 ELISAは,抗

2)対

と し て み ら れ る3)4).

体 量 を 吸 光 度 の 値(O.D.値)で



わ す た め に 抗 体 価 の 変 動 が つ か み に く い,そ

のた

め に 定 量 を 目的 に 測 定 す る 場 合,O.D.値

稔他

を生物定

象検体

風 疹 感 染 患 者 血 清 とMMR(麻 風 疹)ワ

血 清 を 用 い た.

量 法 の 中 心 的 な 分 析 方 法 で あ る平 行 線 定 量 法 を 用

3)酵

い て 統 計 的 に 処 理 す る こ と が 必 要 で あ る5).

風 疹IgG抗

我 々 は,風 G,風

疹IgG抗

疹IgM抗

体検 出系 には プ ロテ イ ン

体 検 出系 に は 抗 風 疹 モ ノ ク ロー ナ

ル 抗 体 を 用 い るELISAに

よ っ て 特 異 性 と実 用 性

に 優 れ た 測 定 試 薬 を 開 発 し,さ

ら に こ の 新 し く確

立 し た 検 出 系 で 平 行 線 検 定6)∼9)を行 う こ と に よ り 風 疹IgG抗

体 と風 疹IgM抗

体の定 量 が可能 で あ

る こ と を 明 ら か に し た10). 本 研 究 で は,風 ム ン プ ス,風

疹,

ク チ ン被 接 種 者 血 清 を 用 い て

風 疹 抗 体 価 の 定 量 を 行 い,抗

体 価 の 変 動 と測 定 の

再 現 性 に つ い て 検 討 し た.

10%Tryptose FBS〕

をBHK-21細

間 培 養

を 入 れ た.以

後, 交i換

間 の 培 養 上 清 を 採 取 し た.そ

た10). 4)IgG・ELISA O.1M炭

酸 重 炭 酸 緩 衝 液(pH9.8)で

Lab社

製,USA)に100μ1/wel1分

ロ プ レ ー トを4℃

注 し た.マ

次 に0.05%Tween-20を

含 む0.1MTris-HCI緩 洗 浄 し,1%BSAを

衝 液 で37℃1時

含 む0.1MTris-HCI緩

の培 養

衝 液 で 被 検 血 清 を 希 釈 し,

間 反 応 を 行 っ た.洗

浄 後,1%Tween-

含 む0.1MTris-HCI緩

リエ チ レ ン グ リ コ ー

を 加 え,4℃ 遠 心 し,沈

で 一 晩 静 置 し た. 渣 を0.15MTNE液

well加

え,室

温(20∼23℃)で1時

洗 浄 後,0.1Mリ

間 反 応 さ れ た.

ン 酸 緩 衝 液(pH6.0)100mlに

オ ル トフ ェ ニ レ ン ジ ア ミ ン ・2塩 酸 塩150mgを

に 加 え た.さ

せ,波

ら に10,000rpm20分

長492nmで

5)IgM捕 O.1Mリ

遠 心 し,

糖 に 重 層 し,25,000rpm

添 加 し て 溶 解 し た.

化 し た.

層 を 採 取 し た.こ た.

用 いてア フ ィ

糖 不 間 遠 心 し た.

糖 ク ッシ ョン上 の 白濁

れ を精 製 風 疹 ウ イル ス抗 原 と し

体(Zymed社

製)を1μg/ml濃

イ ク ロ プ レ ー トを4℃

TNE液(pH8.0)に

糖 を 通 過 し,50%薦

捉ELISA

イ ク ロ プ レ ー ト に100μ1/we11ず

た.マ

25%薦

反応 を停 止 さ

吸 光 度 を 測 定 した.

ン 酸 緩 衝 液(pH7.5)を

ヒ トIgM抗

糖 を 通 過 し た 沈 渣 を0.15M

連 続 勾 配 に 重 層 し,25,000rpm4時

添 加 した 基 質 液 を

EIAマ

150分 遠 心 し た.25%薦

の 溶 解 液 を25%と50%(W/W)薦

酸 化 水 素 水1m1を



ニ テ ィ ー ク ロ マ トグ ラ フ ィ ー で 再 精 製 し た ヤ ギ 抗

〔0.01MTris-HC1,0.15MNaCl,0.001MEDTA,

こ の 上 清 を25%(W/W)蕉

衝液 で希

釈 し た ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ 標 識ProteinGを100μ1/

反 応 さ せ 発 色 さ せ た.4N-H2SO4で

培 養 上 清 に 最 終 濃 度8%ポ

次 に,こ

含 む0.1

間 ブ ロ ッキ ン グ し

作 製 し た.

pH8.0〕

イ ク

で 一 晩 静 置 し て 固相 化 した .

解 し,1%過

10,000rpm20分

風疹 ウイ

イ ク ロ プ レ ー ト(Flow

上 清 を 用 い て 次 の方 法 で 精 製 風 疹 ウ イル ス抗 原 を

ル と0.5%NaClと

使 用 し た.風

ダ ー ゼ 標 識 抗 風 疹 モ ノ ク ロ ーナ ル 抗 体 を 用 い

20と1%BSAを しい培 地

〔Medium:E-MEM,FBS(-)〕

を 行 い,3日

製,USA)を

体 測 定 に は,我 々 が 作 製 し た ペ ル オ キ シ

37℃ で1時

Broth(TPB)十6%

後 に 培 地 を 除 去 し,新

〔Medium:E-MEM+2%FBS〕 毎 日培 地

胞 に感 染 さ

〔Medium:E-MEM+

Phosphate

し た.3日

疹IgM抗

ル オ キ シ ダ ーゼ 標 識

た.ブ ロ ッ キ ン グ 後,1%Tween-20と1%BSAを

風 疹 ウ イ ル スM-33株 で3日

ProteinG(Zeymed社

MTris-HCI緩

原の作製

せ て,35℃

体 測 定 に は,ペ

衝 液(pH7.6)で3回

材 料 と方 法 1)抗

素標識 抗体

ル ス 抗 原 を 希 釈 し,EIAマ

疹 感 染 者 血 清 とMMR(麻

疹)ワ

疹 ・ム ン プ ス ・

クチ ン接 種 前 後 の小 児血 清 お よび 健 常 人

0.1MTris-HCI緩

含 む0.1MTris.HCI緩

間 ブ ロ ッキ ン グ し,100倍

し た 被 検 血 清 を100μ1加 せ た.洗 浄 後,蛋

静 置 して 固 相

衝 液(0.05%Tween-20含)で

3回 洗 浄 後,1%BSAを 衝 液 で37℃,1時

で1晩

度 で つ 分 注 し

え て37℃,1時

白 濃 度0.5μg/mlの

感染症学雑誌

に希釈

間反応 さ 精 製 した 風 疹

第66巻 第8号

1077

平 行 線 定量 法 に よ る風 疹 抗 体 の測 定 ウ イ ル ス を100μl/wellで さ せ た.さ

分 注 し37℃1時

ら に 洗 浄 後,ペ

風 疹 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体(蛋 100μ1/wel1加 後,0.1Mリ

え,室

温 で1時

酸 化 水 素 水1mlを

酸 塩150mgを

6)赤



希 釈 につ い て は,標 準 血 清 は4回,被

オル 溶 解

血 清(A)・(B)は,プ

ール した 風 疹 感 染 ヒ ト血 清

を 用 いた.風

体 に は 標 準 血 清(A),風

IgM抗

反 応 を 停 止 さ せ,

成 験)

No.1血

こ の プ ロ グ ラ ム は,下

疹IgG抗

体 測 定 に お け る標 準 血 清

線 性 が 認 め られ た.被 検 血 清 も直 線 性 清(HI価:2,048倍)で

清(HI価:64倍)で

記 の手順で測定値 の検定

風 疹IgM抗

お よ び 相 対 力 価 の 算 出 を 行 う. 準 血 清 と被 検 血 清 の 希 釈 倍 数 と吸 光 度 を

は2.476,No.8血

は0.235が 得 られ た.

体 測 定 で も標 準 血 清(B)は,直

性 が 認 め ら れ た.被 1,600倍,No.3は100倍

対 数 変 換 す る.

検 血 清No.2は800倍

2)同 時 再 現 性 と 日差 再 現 性 の 検 討

計算

HI抗 体 価 の 異 な る被 検 血 清 を 用 い て 各 血 清 を

す る. 直 線 性 お よ び 平 行 性 の 検 定 は,危

3回 繰 り返 し測 定 し,吸 光 度 と相 対 力 価 の再 現 性

険 率1%で

をTable1に

行 っ た.

Fig.

平 成4年8月20日

の平行性 も

認 め られ た(Fig.2).

の 回 帰 線 の 平 行 性 を 検 定 す る. potency:RP)を

か ら

か ら800倍,No.4は200倍

釈 倍 数 を変 え る こ とで標 準 血 清(B)と

対 力 価(relative



か ら1.600倍 で直 線 性 を 示 した.各 被 検 血 清 は,希

準 血 清及 び被 検血 清 の 直線 性 を検 定 す

る.

(4)相



お よ び(A)と の平 行 性 が 認 め られ た.相 対 力 価 は,

定 量13)14)を行 っ た.

(3)2本

Fig.1は,風

(A)は,直

行線 定量法

北 山 ら12)の開 発 し た プ ロ グ ラ ム を 用 い て 平 行 線

(2)標



使 用 した.

と被 検 血 清 の 用 量 反 応 回 帰 直 線 で あ る.標 準 血 清

た.

(1)標

類 の 自家 製 標 準

1)標 準 血 清 と被 検 血 清 の平 行 線 定 量 法

予 研 法11)に 準 じ て 赤 血 球 凝 集 抑 制 試 験 を 行 っ

7)平

疹IgG抗

体 に は 標 準 血 清(B)を

吸 光 度 を 測 定 し た.

血 球 凝 集 抑 制 試 験(HI試

検 血 清 は2

回 繰 り返 し試 験 した.な お,2種

添 加 した 基 質 液 を 反

応 さ せ 発 色 さ せ た.4N-H2SO4で 波 長492nmで

は100倍 か ら800倍 ま で2倍 段 階 希 釈 を 行 っ た.1

間 反 応 さ せ た.洗

ン 酸 緩 衝 液(pH6.0)100mlに

行 う時,プ レー ト毎 に 標 準 血 清 を配 置

す る.標 準 血 清 は100倍 か ら1,600倍 に,被 検 血 清

白 濃 度;10μg/ml)を

ト フ ェ ニ レ ン ジ ア ミ ン ・2塩 し,1%過

ELISAを

間反 応

ル オ キ シ ダ ーゼ 標 識 抗

1

Anti-rubella

IgG antibody

titration

by the parallel

示 した.

line assay method

森田

1078

Fig. 2

Anti-rubella

Table Repeatability

Reproducibility

同 時 再 現 性 は,用

1

of three

of three

HI:

Hemagglutination

SD:

Standard

deviation,

titration

Technical

CV:

も10%以

results

experiments

O.D:

Coefficient

おいて相

対 力 価 と 吸 光 度 共 に 標 準 偏 差(SD)で

of ELISA

line assay method

experiments

independent

inhibition,

by the parallel

variations

independent

い た 被 検 血 清(A:HI価8倍

以 下,B:16倍,C:64倍,D:128倍)に

変 動 係 数(CV%)で

IgM antibody

稔 他

は0.1以 下,

下 とバ ラ ッ キ は 小 さ

Optical

density,

RP:

Relative

potency,

of variation

か っ た.日

差 再 現 性 は,用

い た 被 検 血 清(E:HI価

8倍 以 下,F:32倍,G:128倍,H:256倍)で 吸 光 度 で 表 示 し た 場 合,HI価



の 高 い 血 清(G・H)

で 標 準 偏 差 が0.1以 上,変 動 係 数10%以 感 染 症 学 雑誌

上 に な った

第66巻

第8号

1079

平行線定量法に よる風疹抗体 の測定 Fig. 3

Correlation

IgG-ELISA

values

between

rubella

HI titers

Fig. 5

and

Correlation

IgG-ELISA

of 294 sera

between

rubella

by the parallel

HI titers

line assay

and

method

of

sera

Fig. 4 Correlation between anti-rubella IgG antibody titers of 294 serum samples from healthy subjects determined by the HI test and the parallel line assay method

風 疹 抗 体 検 査 依 頼 の あ った100検 体 に つ い て 風 疹IgG抗

体 をELISAとHI法

IgM抗

体 は,我

ELISA試

で 測 定 した.風

々 の 開 発 し たELISAと

薬(ル ベ ラIgM-EIA「

生 研 社 製)の2法 風 疹IgG抗

生 研 」(R):デ ン カ

で 確 認 した.

体 は,100例

中76例 がELISAとHI

法 で 陽 性 で あ った.風 疹IgM抗 がELISA(2法)で

体 は,76例 中6例

陽 性 を 示 した.

こ の風 疹IgG抗 風 疹IgG抗



市 販

体 陽 性 ・IgM抗 体 陽 性 血 清 は,

体 陽 性 ・IgM抗 体 陰 性 血 清 に比 し,RP

値 の低 値 が 見 られ た(Fig.5). 5)MMRワ

ク チン 接 種 前 後 血 清 で の 風 疹IgG

抗体 の測定 が,相

対 力 価 で 表 し た 場 合 は,標

変 動 係 数10%以

準 偏 差0.1以

下 と共 に 低 値 を 示 し,バ

下 で

ラ ツキ の

常 人 血 清 に よ る 風 疹IgG抗

体 のHI価



較 で は,相

は,相

を 用 い て 吸 光 度 とHI価

の比

た,相

対 力 価 とHI価

の比較

関 係 数0.781(Y=0.067X-0.110)で

あ っ

4)風

疹IgM抗

平 成4年8月20日

クチ ン接 種 後 の血 清(接 種

か ら1年 間 経過 に採 血)58例

IgG抗 体 と風 疹IgM抗

を用 い て 風 疹

体 の 測 定 を 行 った.

風 疹IgG抗

クチ ン接 種 前 の血 清 は,ELISAに 体 と風 疹IgM抗

MMRワ

よる

体 の測 定 で は す べ て

ク チン 接 種 後 の 血 清 で は,風 疹IgG抗

体 陽 性 ・風 疹IgM抗

体 陽 性 血 清 は25例,風

抗 体 陽 性 ・風 疹IgM抗

た(Fig.4).

の測 定

とMMRワ

体 価8倍

陰 性 で あ った.

関 係 数0.897(Y=0.174X-0.189)で

あ っ た(Fig.3).ま

ク チン 接 種 前 の 血 清(HI抗

MMRワ

相 対 力 価 お よ び吸 光 度 の 比 較 健 常 人 血 清294例

以下)94例 後3日

小 さ い 結 果 が 得 ら れ た. 3)健

MMRワ

体 陽 性 血 清 で の 風 疹IgG抗



疹IgG

体 陰 性 血 清 は33例 で あ っ

た. このMMRワ

ク チン 接 種 後 の 血 清 に お い て も

森田

1080

Fig. 6

Correlation

IgG-ELISA

between

rubella

by the parallel

152 sera samples

obtained

HI titers

line assay before

and

method

and after

稔 他 Table

of

2

levels

vacci-

Comparison obtained

lutination

of

by

inhibition

anti-rubella

IgG-ELISA test

antibody

and

hemagg-

(HI)

nation

*RP: Relative potency

価8倍

の 血 清 は,相

# SD : Stand

ard deviation

対 力 価0.012∼0.075で

0.031で あ った こ と よ り風 疹IgG抗

平均

体 の有無 が 明

確 に 判 定 さ れ た. ま た,相 対 力価 が 低 くな る に従 い,変 動 係 数 が 大 き くな る傾 向 が 認 め られ た. 風 疹IgG抗

体 陽 性 ・IgM抗

体 陽 性 血 清 は,風 疹

IgG抗 体 陽 性 ・IgM抗 体 陰 性 血 清 に比 し,RP値



7)風 疹 感 染 者 血 清 を 用 い た 抗 体 価 の 経 時 的 変 化

低 値 が 見 られ た(Fig.6). 6)HI価

Table2は553例 い,得

症 例(A)は,8歳

の相 対 力 価 区 間 の 換 算(推 定) を用 い てHI法

られ た 相 対 力 価 とHI価

に,相 対 力 価 をHI価

を 比 較 した .さ



HI価



体 の 相 対 力 価 で は195日 目 ま で 抗 体 上 昇 が 確 認 さ

区 間 を 推 定 した 結 果 で あ る.HI価8倍 以 下 のす べ て の血 清 は,相 対 力 価0 .001以 下 で あ った.HI

3

Detection

発疹 出現後

2日 ・9日 ・195日に採 血 し,風 疹 抗 体 を 測 定 した.

とELISAを

に 換 算 した 場 合 の 相 対 力 価

Table

の 学 童 児(女)で

of rubella

は,9日

目で ピー クを 示 した が 風 疹IgG抗

れ た. 症 例(B)は,23歳

の 男 性 で 発 疹 出現 後2日

・9

日 ・29日 ・57日 に 採 血 し,同 様 に風 疹 抗 体 を測 定

antibody

in 2 cases with

rubella

Case (A)

Case (B)

# N.D: Not Done 感 染 症学 雑 誌

第66巻

第8号

平行線定量法 による風疹抗体の測定 Table

4

Detection

of rubella

antibody

in 3 cases

1081

after

MMR vaccination

Case (C)

Case (D)

Case (E)

した.HI価

はす べ て256倍 で 抗 体 変 動 は 見 られ な

か った が,相 対 力 価 で表 す と風 疹IgG抗 て 抗 体 価 の 変 動 が 確 認 され た.さ

体 におい

確 立 した.こ の確 立 した 系 に平 行 線 定 量

法 を 用 い て そ の 定 量 性 と特 異 性 に つ い て 検 討 を 行 った.

らに,風 疹IgM

抗 体 の 相 対 力 価 の減 少 傾 向 が 明 らか に観 察 され た

ELISAは,各

種 感 染 症 に お い て 術 式 の標 準 化 が

確 立 され て い るに も か か わ らず,測 定 され た 吸 光

(Table3). 8)MMRワ

ク チ ン接 種 者 血 清 を 用 い た 経 時 的

度 に よ っ て抗 体 価 を表 示 す る方 法 は,再 現 性 や 正 確 性 に関 して 必 ず し も十 分 に 検 討 さ れ て い な い.

変化 症 例(C)・

ELISAを

症 例(D)・

さ らに,ELISAは,測

症 例(E)は,MMRワ

定者あ るいは施設問 に よ

ク チ ン接 種 日か ら抗 体 価 を経 時 的 に追 跡 した 結 果

りぼ らつ きが 多 い こ と,ま た,他

の測 定 方 法 との

で あ る.

比 較 が 困 難 で あ る こ と 等,多

くの 問 題 が あ

風 疹IgG抗

体 と風 疹IgM抗

体 の 抗 体 価 がHI

価 に 比 し,抗 体 量 を よ り明 確 に 反 映 し て い た

平 行 線 定 量 法 に よ って 得 られ る抗 体 価 は標 準 血 清 に 対 す る相 対 力 価 で あ る の で 標 準 化 を 正 確 に

(Table4). 考

行 った 標 準 血 清 を 用 い て 測 定 す る こ とでELISA



我 々 は,感 度 ・特 異 性 の面 で よ り精 度 の 高 い風 疹 抗 体 測 定 試 薬 を 作 製 した.風 疹IgG抗 特 異IgG抗

る8)9)15).

体測定 は

体 を測 定 す るペ ル ナ キ シ ダーゼ標識

プ ロ テ インGを

用 い た.風

疹IgM抗

体 測定 には

抗 風 疹 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 を 用 い たIgM捕 平成4年8月20日



に お け る変 動 因 子 を 十 分 に コ ン トロ ール で き る. 平 行 線 定 量 法 は,相 対 力 価 に よ って 表 示 す るた めELISA単

位 に換 算 す る こ とが 容 易 で あ る.そ

の た めELISAに 法 と考 え られ る.

よ る精 度 管 理 に 極 め て 有 用 な 方

森田

1082

マ イ ク ロELISAに 準 血 清(A・B)の

お け る 平 行 線 定 量 法 は,標

す べ て に お い て直 線 性 が認 め ら

れ た.被 検 血 清 につ い て は 風 疹IgG抗 た 被 検 血 清 す べ て 標 準 血 清(A)と 成 立 した.し か し,風 疹IgM抗

体 は,用 い

平行線定量 法が 体 は,抗 体 量 の 違

い に よ っ て 用 量 反 応 回 帰 直 線 のパ タ ー ンが 違 うた め,被 検 血 清 の 希 釈 範 囲 を 高 め に変 更 す る必 要 が

稔他 本 研 究 は千 代 田生命 健 康 開 発事 業 団 に よる社 会 更 生事 業 助 成 の援 助 を受 け て行 わ れ た.ま た,本 論 文 の要 旨の一 部 は,第37回

日本 臨 床病 理 学 会総 会(1990年2月,東

平 行 線定 量 法 の プ ログ ラ ムを供 与 頂 い た 国立 公 衆衛 生 院 北 山秋 雄博 士,千 葉県 衛 生 研究 所 春 日邦子 氏 に感 謝 い た し ます.ま た,MMRワ

クチ ン接 種 血 清 を 分与 頂 い た済 生 会

中央 病 院 中 山哲 夫博 士 に感 謝 いた し ます:

あ った.



健 常 人 血 清 に お け るHI価

と吸 光 度 お よ び相 対

1) 吉 田

晃,

力 価 と の比 較 に お い て 良 い 相 関 を示 した.し か し,

野 礼 作:

風 疹IgM抗

IgM抗 331

体 を 含 む 血 清 を 用 い て ス ク リー ニ ン

グ した 結 果,Fig.1よ

り各HI価

を相 対 力 価 で 表

す 相 対 力 価 区 間 よ り明 ら か に 外 れ る 血 清 が あ っ た.こ

の 血 清 の 多 くは,低 い 相 対 力 価 を 示 し て い

た.

有 無 を確 認 す る必 要 が あ る と思 わ れ る. また,同 は,と

よ りバ ラ ッ キ の 小 さ い 結 果 が 得 られ た.各

市販

薬 の違 い や ロ ッ ト間 の 誤 差 お よ び 検 査

施 設 問 の 測 定 誤 差 等 か ら生 じ る問 題 は,標 準 管 理 血 清 の 統 一 お よび 吸 光 度 か ら相 対 力 価 へ 表 示 す る こ とでELISAの

精 度 管 理 に極 め て有 用 で あ る と

考 え られ る. 今 回,自 家 製 の 標 準 血 清 を 使 用 した が,早 急 に 公 的 機 関 に よ っ て標 準 管 理 血 清 の 標 準 品 が 確 立 さ れ,全

国 の 検 査 施 設 に お い て使 用 され る こ とを 期

待 した い. ELISAに

よ る風 疹 感 染 者 とMMRワ

ク チ ン接

種 者 血 清 の 経 時 的 変 化 に お い て 風 疹IgG抗 風 疹IgM抗

体 と

体 の相 対 力 価 は,抗 体 価 の 推 移 を よ り

尚: 545-550,

38:

1171-1179,

1989.

1990. 高 木 謙 二,

北 山 秋 雄,

矢 崎 廣 久,



によ る

感 染 症 誌,

64:

1990.

pretation of spectrophotometric absorbance values to define result of enzyme-linked immunosorbent assay. J. Clin. Microbiol., 11: 398 401, 1980. 8) Malvano, R., Bonioro, A., Dovis, M. & Zannino, M.: ELISA for antibody measurement: Aspects related to data expression. J. Immunol. Method, 48: 51-60, 1982. 9) Melville-Smith, M. E., Seagroatt, V.A. & Watkins, J. T.: A comparison of enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) with the toxin neutralization test in mice as a method for the estimation of tetanus antitoxin in human sera. J. Biol. Stand., 11: 137-144, 1983. 10)

森 田

ELISA法 て. 11)

動 を よ り明確 に反 映 す る こ とが 示 唆 され た.

風 疹 抗体 検 査 の

6) DeSavigny, D. & Voller, A.: The communication of ELISA data from labolatory to clinician. J. Immunol. Assay. 1 : 105-128, 1980. 7) Heck, F. C., Williams, J. D. & Pruett, J.: Inter-

体 の み な らず

よ り,抗 体 量 の 変

矢 吹 朗 彦:

平 行 線 定 量 法 を 用 い たELISA法

稔,

鈴 木 達 夫,

Protein-Gと

に よ る抗 体 価 の 定 量 は,風 疹IgG抗



産 婦 人 科 の 立 場 か ら . 臨 床 と ウ イ ル ス,

内 村 真 佐 子,

967-972,

この こ と か ら平 行 線 定 量 法 を 応 用 したELISA

体 に お い て もHI価

朝 本 明 宏,

人 血 清 中 ジ フ テ リア 抗 体 の 測 定.

良 く反 映 して い た.

風 疹IgM抗

川名

内 善 信:

もに バ ラ ツキ の 小 さ い結 果 が 得 られ た .日

ELISA試

勉,

18:

時 再 現 性 の 検 討 で は相 対 力 価 と吸 光 度

に ノミラ ツキ が み られ た が,相 対 力 価 で 表 す こ とに

畠 野 靖 子,

に よる風 疹 ウ イル ス

, 1984.

産 婦 人 科 の 実 際, 4)

5)

差 再 現 性 は,吸 光 度 で表 す と標 準 偏 差 と変 動 係 数

引 地 一 昌,

捉ELISA法

問 題 点 と商 業 検 査 機 関 の 現 状 医 療 に お け る 意 義.

よ っ て 相 対 力 価 区 間 を 明 確 に し,そ の 区 間 か ら外 体の

IgM捕

2) Wielaard, F., Denissen, A., Van Elleswijk, J. & Van Gemert, G.: Clinical validation of an antibody-capture anti-rubella IgM-ELISA. J. Virol. Method., 10: 349-354, 1985.

準管 理 血清 の統一 を行 うこ とに

れ た り,疑 わ しい検 体 につ い て は 風 疹IgM抗



槻 舘 由 美 子,

体 の 測 定 に つ い て.臨 床 と ウ イ ル ス, 12: 28

3) 千 場

す な わ ち,標

京)に

お いて 発表 した.

鈴 木 雄 次 郎,

小 松 治 子:

モ ノ ク ロ ーナ ル 抗 体 を 用 い た に よ る風 疹 ウ イ ル ス抗 体 の測 定 につ い

臨 床 と ウ イ ル ス,

厚 生 省 監 修:

19: 135-142,

微 生 物 検 査 必 携.

チ ア 検 査. 第2版,(日 -356 , 1978.

1990.

ウ イ ル ス ・ リケ ッ

本 公 衆 衛 生 協 会 編), p.351

感 染 症 学 雑誌

第66巻

第8号

平行線定量法 による風疹抗体の測定 12)

北 山 秋 雄, 内 村 真 佐 子, 市 村

博, 大 田 原 美 作 雄:

パ ー ソ ナ ル コ ン ピ ュ ー タ を 用 い たELISA法 体 価 処 理 ・解 析 シ ス テ ム の 開 発 に つ い て.

13)

衛 研 報 告,

12: 41-44,

北 山 秋 雄,

春 日邦 子,

時 枝 正 吉,

臨 床 と ウ イ ル ス,

平 行 線定 量 15:

369-372,

1987. 14)

北 山 秋 雄,

Microtiter

春 日邦 子,

十 川 知 子,

Enzyme-Linked

時 枝 正 吉,

by

平 行 線定 量 を 用 い

17: 411-414,

臨床 とウ

1989.

市村

Immunosorbent

―Analysis

宗:

15) Sedgwik, A. K., Ballow, M., Spanks, K. & Yilton, C.: Rapid quantitative microenzymelinked immunosorbent assay for tetanus antibodies. J. Clin. Microbiol., 18: 104-109, 1983.

市村

マ イ ク ロELISA法

に よ る ム ン プ ス 抗 体 測 定:-第1報.

平 山

に よ る ム ン プ ス 抗 体 瀬 定.-第2報.

相 対 力 価 と 中 和 抗 体 価 の 比 較 ・検 討-.

千葉県

イ ル ス,

十 川 知 子, 宗:

大 田 原 美 作 雄,

たELISA法

1988.

博, 大 田 原 美 作 雄, 平 山

法 の 有 効 性-.

博,

の抗

1083

Parallel

Assay Line

for Rubella Assay

Antibodies

in Human

Sera

Method―

Minoru MORITA & Tatsuo SUZUKI Departmentof BiomedicalLaboratory,The KitasatoInstituteHospital Yujiro SUZUKI Departmentof Virology,The KitasatoInstitute Hiroo HOSHINO Departmentof Hygiene,GunmaUniversitySchoolof Medicine Antibodies against rubella virus in human sera were measured by ELISA and antibody titers were calculated by the parallel line assay method. The dose response regression curves of standard sera and test sera containing IgG antibody calculated by the parallel line assay method showed linearity, and were parallel to one another. However, the regression lines of sera positive for IgM antibody against rubella virus were not parallel to one another in the low dilution region, but parallel in the higher dilution region. A good correlation was observed between the rubella IgG antibody titers measured by the hemagglutination-inhibition (HI) test and those calculated by the parallel line assay method. The coefficient of the correlation was 0.781. Time-course studies of IgG or IgM antibody titers against rubella virus in rubella patients or in vaccines with MMR vaccine indicated that the ELISA was more precise and specific method than the HI test. Thus, the parallel line assay method using ELISA is considered to be a more useful method for the detection and quantification of antibodies to rubella than the conventional HI test.

平 成4年8月20日

[Microtiter enzyme-linked immunosorbent assay for rubella antibodies in human sera--analysis by parallel line assay method].

Antibodies against rubella virus in human sera were measured by ELISA and antibody titers were calculated by the parallel line assay method. The dose ...
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