1075
ELISAを
用 いた 風疹IgG・IgM抗
体 の平 行 線 定量 法 に よ る解析
北里研究所病院研究部 森
田
稔
鈴
木
達
夫
北里研究所研究部 鈴
木
雄
次
郎
群馬大学医学部衛生学 星
野
洪
郎
(平成4年2月28日 受付) (平成4年4月10日 受理)
Key
words:
ELISA,
parallel
rubella
antibodies,
要 平 行 線 定 量 法 を 用 い たELISAで IgG・ELISAに
line assay
method,
relative
potency
旨
風 疹 抗 体 を 測 定 し,相 対 力 価 とHI価
お け る 平 行 線 定 量 法 は,標
標 準 血 清 に 対 して 平 行 性 を 示 した.し
と の 比 較 検 討 を 行 った.
準 血 清 お よ び 被 検 血 清 に お い て 直 線 性 を 示 し,被 検 血 清 は
か し,IgM捕
捉ELISAで
違 い に よ っ て 用 量 反 応 回 帰 直 線 の パ タ ー ン が 違 うた め,被
の 風 疹IgM抗
体 陽 性 血 清 は,抗 体 量 の
検 血 清 の 希 釈 倍 数 の 範 囲 を 高 め に 変 更 す る必
要 が あ った. 風 疹IgG抗
体 の 相 対 力 価 とHI抗
体 価 の 比 較 に お い て 相 関 性(相 関 係 数0.781)が
認 め られ た.ま
た,
相 対 力 価 で表 す こ とで 変 動 係 数 の 小 さ い 結 果 が 得 ら れ た. 平 行 線 定 量 法 を 用 い たELISAに
よ っ て 得 られ る 相 対 力 価 は,風
疹 感 染 者 とMMRワ
ク チ ン被 接 種 者
の 経 時 的 抗 体 価 の 変 動 を 良 く反 映 し て い た. 以 上 よ り平 行 線 定 量 法 を 応 用 し たELISAに
よ る 抗 体 測 定 は,抗
体 保有 状 況 の指 標 として有 用 な方 法
で あ る こ とが 示 唆 さ れ た.
序
現 在 風 疹 抗 体 価 の 測 定 方 法 と して 最 も普 及 し て
文
風 疹 は,特 有 の 発 疹 ・ リンパ 節 の腫 脹 お よ び軽
い る の は,赤 血 球 凝 集 抑 制 試 験(Hemagglutina-
微 な発 熱 を 主 症 状 とす る小 児 に好 発 す る急 性 の発
tion Inhibition,HI)で
疹 性 疾 患 で あ る.し か し,妊 娠 早 期 に 感 受 性 の あ
清(ペ ァ血 清)を 用 い てHI抗
る妊 婦 が 風 疹 に 罹 患 す る と生 まれ て く る子 供 に先
れ れ ば,ご
天 性 の 奇 形(先
天 性 風 疹 症 候 群)を
生 ず る こ とが
あ る.急 性 期 と回復 期 血 体価 の上昇 が確認 さ
く最 近 感 染 した と判 定 され る.
しか し,急 性 時期 の 採 血 が遅 れ た り,ま た ペ ア 血 清 の採 血 が で きな か った り して 確 実 な診 断 が 困
高 頻 度 に み られ る. 風 疹 の 抗 体 検 査 は,発 疹 性 疾 患 の鑑 別 に用 い ら
難 な場 合 が 多 い.そ こで,単 一 血 清 で 風 疹IgM抗
れ る だ け で は な く,妊 婦 の 人 工 流 産 中 絶 の 適 応 に
体 を証 明 す る こ とが で きれ ぽ,診 断 の有 力 な 助 け
対 して も重 要 性 が あ る.さ
とな る1)2).
ら に,ワ ク チ ン接 種 後
の効 果 判 定 に も用 い られ て い る. 別 刷 請 求 先:(〒108)港
区 白金5-9-1
北 里 研 究所 病 院 研 究部 平 成4年8月20日
近 年,ELISAに
よ る 風 疹IgG抗
体 と風 疹IgM
抗 体 の 測 定 法 が 開 発 され て きた.し か し,実 際 の 森田
稔
診 断 に 用 い られ て い る各 商 業 検 査 施 設 の報 告 と臨
森田
1076
床 所 見 と の 不 一 致 が,時 ELISAは,抗
2)対
と し て み ら れ る3)4).
体 量 を 吸 光 度 の 値(O.D.値)で
表
わ す た め に 抗 体 価 の 変 動 が つ か み に く い,そ
のた
め に 定 量 を 目的 に 測 定 す る 場 合,O.D.値
稔他
を生物定
象検体
風 疹 感 染 患 者 血 清 とMMR(麻 風 疹)ワ
血 清 を 用 い た.
量 法 の 中 心 的 な 分 析 方 法 で あ る平 行 線 定 量 法 を 用
3)酵
い て 統 計 的 に 処 理 す る こ と が 必 要 で あ る5).
風 疹IgG抗
我 々 は,風 G,風
疹IgG抗
疹IgM抗
体検 出系 には プ ロテ イ ン
体 検 出系 に は 抗 風 疹 モ ノ ク ロー ナ
ル 抗 体 を 用 い るELISAに
よ っ て 特 異 性 と実 用 性
に 優 れ た 測 定 試 薬 を 開 発 し,さ
ら に こ の 新 し く確
立 し た 検 出 系 で 平 行 線 検 定6)∼9)を行 う こ と に よ り 風 疹IgG抗
体 と風 疹IgM抗
体の定 量 が可能 で あ
る こ と を 明 ら か に し た10). 本 研 究 で は,風 ム ン プ ス,風
疹,
ク チ ン被 接 種 者 血 清 を 用 い て
風 疹 抗 体 価 の 定 量 を 行 い,抗
体 価 の 変 動 と測 定 の
再 現 性 に つ い て 検 討 し た.
10%Tryptose FBS〕
をBHK-21細
間 培 養
を 入 れ た.以
後, 交i換
間 の 培 養 上 清 を 採 取 し た.そ
た10). 4)IgG・ELISA O.1M炭
酸 重 炭 酸 緩 衝 液(pH9.8)で
Lab社
製,USA)に100μ1/wel1分
ロ プ レ ー トを4℃
注 し た.マ
次 に0.05%Tween-20を
含 む0.1MTris-HCI緩 洗 浄 し,1%BSAを
衝 液 で37℃1時
含 む0.1MTris-HCI緩
の培 養
衝 液 で 被 検 血 清 を 希 釈 し,
間 反 応 を 行 っ た.洗
浄 後,1%Tween-
含 む0.1MTris-HCI緩
リエ チ レ ン グ リ コ ー
を 加 え,4℃ 遠 心 し,沈
で 一 晩 静 置 し た. 渣 を0.15MTNE液
well加
え,室
温(20∼23℃)で1時
洗 浄 後,0.1Mリ
間 反 応 さ れ た.
ン 酸 緩 衝 液(pH6.0)100mlに
オ ル トフ ェ ニ レ ン ジ ア ミ ン ・2塩 酸 塩150mgを
に 加 え た.さ
せ,波
ら に10,000rpm20分
長492nmで
5)IgM捕 O.1Mリ
遠 心 し,
糖 に 重 層 し,25,000rpm
添 加 し て 溶 解 し た.
化 し た.
層 を 採 取 し た.こ た.
用 いてア フ ィ
糖 不 間 遠 心 し た.
糖 ク ッシ ョン上 の 白濁
れ を精 製 風 疹 ウ イル ス抗 原 と し
体(Zymed社
製)を1μg/ml濃
イ ク ロ プ レ ー トを4℃
TNE液(pH8.0)に
糖 を 通 過 し,50%薦
捉ELISA
イ ク ロ プ レ ー ト に100μ1/we11ず
た.マ
25%薦
反応 を停 止 さ
吸 光 度 を 測 定 した.
ン 酸 緩 衝 液(pH7.5)を
ヒ トIgM抗
糖 を 通 過 し た 沈 渣 を0.15M
連 続 勾 配 に 重 層 し,25,000rpm4時
添 加 した 基 質 液 を
EIAマ
150分 遠 心 し た.25%薦
の 溶 解 液 を25%と50%(W/W)薦
酸 化 水 素 水1m1を
溶
ニ テ ィ ー ク ロ マ トグ ラ フ ィ ー で 再 精 製 し た ヤ ギ 抗
〔0.01MTris-HC1,0.15MNaCl,0.001MEDTA,
こ の 上 清 を25%(W/W)蕉
衝液 で希
釈 し た ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ 標 識ProteinGを100μ1/
反 応 さ せ 発 色 さ せ た.4N-H2SO4で
培 養 上 清 に 最 終 濃 度8%ポ
次 に,こ
含 む0.1
間 ブ ロ ッキ ン グ し
作 製 し た.
pH8.0〕
イ ク
で 一 晩 静 置 し て 固相 化 した .
解 し,1%過
10,000rpm20分
風疹 ウイ
イ ク ロ プ レ ー ト(Flow
上 清 を 用 い て 次 の方 法 で 精 製 風 疹 ウ イル ス抗 原 を
ル と0.5%NaClと
使 用 し た.風
ダ ー ゼ 標 識 抗 風 疹 モ ノ ク ロ ーナ ル 抗 体 を 用 い
20と1%BSAを しい培 地
〔Medium:E-MEM,FBS(-)〕
を 行 い,3日
製,USA)を
体 測 定 に は,我 々 が 作 製 し た ペ ル オ キ シ
37℃ で1時
Broth(TPB)十6%
後 に 培 地 を 除 去 し,新
〔Medium:E-MEM+2%FBS〕 毎 日培 地
胞 に感 染 さ
〔Medium:E-MEM+
Phosphate
し た.3日
疹IgM抗
ル オ キ シ ダ ーゼ 標 識
た.ブ ロ ッ キ ン グ 後,1%Tween-20と1%BSAを
風 疹 ウ イ ル スM-33株 で3日
ProteinG(Zeymed社
MTris-HCI緩
原の作製
せ て,35℃
体 測 定 に は,ペ
衝 液(pH7.6)で3回
材 料 と方 法 1)抗
素標識 抗体
ル ス 抗 原 を 希 釈 し,EIAマ
疹 感 染 者 血 清 とMMR(麻
疹)ワ
疹 ・ム ン プ ス ・
クチ ン接 種 前 後 の小 児血 清 お よび 健 常 人
0.1MTris-HCI緩
含 む0.1MTris.HCI緩
間 ブ ロ ッキ ン グ し,100倍
し た 被 検 血 清 を100μ1加 せ た.洗 浄 後,蛋
静 置 して 固 相
衝 液(0.05%Tween-20含)で
3回 洗 浄 後,1%BSAを 衝 液 で37℃,1時
で1晩
度 で つ 分 注 し
え て37℃,1時
白 濃 度0.5μg/mlの
感染症学雑誌
に希釈
間反応 さ 精 製 した 風 疹
第66巻 第8号
1077
平 行 線 定量 法 に よ る風 疹 抗 体 の測 定 ウ イ ル ス を100μl/wellで さ せ た.さ
分 注 し37℃1時
ら に 洗 浄 後,ペ
風 疹 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体(蛋 100μ1/wel1加 後,0.1Mリ
え,室
温 で1時
酸 化 水 素 水1mlを
酸 塩150mgを
6)赤
浄
希 釈 につ い て は,標 準 血 清 は4回,被
オル 溶 解
血 清(A)・(B)は,プ
ール した 風 疹 感 染 ヒ ト血 清
を 用 いた.風
体 に は 標 準 血 清(A),風
IgM抗
反 応 を 停 止 さ せ,
成 験)
No.1血
こ の プ ロ グ ラ ム は,下
疹IgG抗
体 測 定 に お け る標 準 血 清
線 性 が 認 め られ た.被 検 血 清 も直 線 性 清(HI価:2,048倍)で
清(HI価:64倍)で
記 の手順で測定値 の検定
風 疹IgM抗
お よ び 相 対 力 価 の 算 出 を 行 う. 準 血 清 と被 検 血 清 の 希 釈 倍 数 と吸 光 度 を
は2.476,No.8血
は0.235が 得 られ た.
体 測 定 で も標 準 血 清(B)は,直
性 が 認 め ら れ た.被 1,600倍,No.3は100倍
対 数 変 換 す る.
検 血 清No.2は800倍
2)同 時 再 現 性 と 日差 再 現 性 の 検 討
計算
HI抗 体 価 の 異 な る被 検 血 清 を 用 い て 各 血 清 を
す る. 直 線 性 お よ び 平 行 性 の 検 定 は,危
3回 繰 り返 し測 定 し,吸 光 度 と相 対 力 価 の再 現 性
険 率1%で
をTable1に
行 っ た.
Fig.
平 成4年8月20日
の平行性 も
認 め られ た(Fig.2).
の 回 帰 線 の 平 行 性 を 検 定 す る. potency:RP)を
か ら
か ら800倍,No.4は200倍
釈 倍 数 を変 え る こ とで標 準 血 清(B)と
対 力 価(relative
線
か ら1.600倍 で直 線 性 を 示 した.各 被 検 血 清 は,希
準 血 清及 び被 検血 清 の 直線 性 を検 定 す
る.
(4)相
績
お よ び(A)と の平 行 性 が 認 め られ た.相 対 力 価 は,
定 量13)14)を行 っ た.
(3)2本
Fig.1は,風
(A)は,直
行線 定量法
北 山 ら12)の開 発 し た プ ロ グ ラ ム を 用 い て 平 行 線
(2)標
疹
使 用 した.
と被 検 血 清 の 用 量 反 応 回 帰 直 線 で あ る.標 準 血 清
た.
(1)標
類 の 自家 製 標 準
1)標 準 血 清 と被 検 血 清 の平 行 線 定 量 法
予 研 法11)に 準 じ て 赤 血 球 凝 集 抑 制 試 験 を 行 っ
7)平
疹IgG抗
体 に は 標 準 血 清(B)を
吸 光 度 を 測 定 し た.
血 球 凝 集 抑 制 試 験(HI試
検 血 清 は2
回 繰 り返 し試 験 した.な お,2種
添 加 した 基 質 液 を 反
応 さ せ 発 色 さ せ た.4N-H2SO4で 波 長492nmで
は100倍 か ら800倍 ま で2倍 段 階 希 釈 を 行 っ た.1
間 反 応 さ せ た.洗
ン 酸 緩 衝 液(pH6.0)100mlに
行 う時,プ レー ト毎 に 標 準 血 清 を配 置
す る.標 準 血 清 は100倍 か ら1,600倍 に,被 検 血 清
白 濃 度;10μg/ml)を
ト フ ェ ニ レ ン ジ ア ミ ン ・2塩 し,1%過
ELISAを
間反 応
ル オ キ シ ダ ーゼ 標 識 抗
1
Anti-rubella
IgG antibody
titration
by the parallel
示 した.
line assay method
森田
1078
Fig. 2
Anti-rubella
Table Repeatability
Reproducibility
同 時 再 現 性 は,用
1
of three
of three
HI:
Hemagglutination
SD:
Standard
deviation,
titration
Technical
CV:
も10%以
results
experiments
O.D:
Coefficient
おいて相
対 力 価 と 吸 光 度 共 に 標 準 偏 差(SD)で
of ELISA
line assay method
experiments
independent
inhibition,
by the parallel
variations
independent
い た 被 検 血 清(A:HI価8倍
以 下,B:16倍,C:64倍,D:128倍)に
変 動 係 数(CV%)で
IgM antibody
稔 他
は0.1以 下,
下 とバ ラ ッ キ は 小 さ
Optical
density,
RP:
Relative
potency,
of variation
か っ た.日
差 再 現 性 は,用
い た 被 検 血 清(E:HI価
8倍 以 下,F:32倍,G:128倍,H:256倍)で 吸 光 度 で 表 示 し た 場 合,HI価
は
の 高 い 血 清(G・H)
で 標 準 偏 差 が0.1以 上,変 動 係 数10%以 感 染 症 学 雑誌
上 に な った
第66巻
第8号
1079
平行線定量法に よる風疹抗体 の測定 Fig. 3
Correlation
IgG-ELISA
values
between
rubella
HI titers
Fig. 5
and
Correlation
IgG-ELISA
of 294 sera
between
rubella
by the parallel
HI titers
line assay
and
method
of
sera
Fig. 4 Correlation between anti-rubella IgG antibody titers of 294 serum samples from healthy subjects determined by the HI test and the parallel line assay method
風 疹 抗 体 検 査 依 頼 の あ った100検 体 に つ い て 風 疹IgG抗
体 をELISAとHI法
IgM抗
体 は,我
ELISA試
で 測 定 した.風
々 の 開 発 し たELISAと
薬(ル ベ ラIgM-EIA「
生 研 社 製)の2法 風 疹IgG抗
生 研 」(R):デ ン カ
で 確 認 した.
体 は,100例
中76例 がELISAとHI
法 で 陽 性 で あ った.風 疹IgM抗 がELISA(2法)で
体 は,76例 中6例
陽 性 を 示 した.
こ の風 疹IgG抗 風 疹IgG抗
疹
市 販
体 陽 性 ・IgM抗 体 陽 性 血 清 は,
体 陽 性 ・IgM抗 体 陰 性 血 清 に比 し,RP
値 の低 値 が 見 られ た(Fig.5). 5)MMRワ
ク チン 接 種 前 後 血 清 で の 風 疹IgG
抗体 の測定 が,相
対 力 価 で 表 し た 場 合 は,標
変 動 係 数10%以
準 偏 差0.1以
下 と共 に 低 値 を 示 し,バ
下 で
ラ ツキ の
常 人 血 清 に よ る 風 疹IgG抗
体 のHI価
と
較 で は,相
は,相
を 用 い て 吸 光 度 とHI価
の比
た,相
対 力 価 とHI価
の比較
関 係 数0.781(Y=0.067X-0.110)で
あ っ
4)風
疹IgM抗
平 成4年8月20日
クチ ン接 種 後 の血 清(接 種
か ら1年 間 経過 に採 血)58例
IgG抗 体 と風 疹IgM抗
を用 い て 風 疹
体 の 測 定 を 行 った.
風 疹IgG抗
クチ ン接 種 前 の血 清 は,ELISAに 体 と風 疹IgM抗
MMRワ
よる
体 の測 定 で は す べ て
ク チン 接 種 後 の 血 清 で は,風 疹IgG抗
体 陽 性 ・風 疹IgM抗
体 陽 性 血 清 は25例,風
抗 体 陽 性 ・風 疹IgM抗
た(Fig.4).
の測 定
とMMRワ
体 価8倍
陰 性 で あ った.
関 係 数0.897(Y=0.174X-0.189)で
あ っ た(Fig.3).ま
ク チン 接 種 前 の 血 清(HI抗
MMRワ
相 対 力 価 お よ び吸 光 度 の 比 較 健 常 人 血 清294例
以下)94例 後3日
小 さ い 結 果 が 得 ら れ た. 3)健
MMRワ
体 陽 性 血 清 で の 風 疹IgG抗
体
疹IgG
体 陰 性 血 清 は33例 で あ っ
た. このMMRワ
ク チン 接 種 後 の 血 清 に お い て も
森田
1080
Fig. 6
Correlation
IgG-ELISA
between
rubella
by the parallel
152 sera samples
obtained
HI titers
line assay before
and
method
and after
稔 他 Table
of
2
levels
vacci-
Comparison obtained
lutination
of
by
inhibition
anti-rubella
IgG-ELISA test
antibody
and
hemagg-
(HI)
nation
*RP: Relative potency
価8倍
の 血 清 は,相
# SD : Stand
ard deviation
対 力 価0.012∼0.075で
0.031で あ った こ と よ り風 疹IgG抗
平均
体 の有無 が 明
確 に 判 定 さ れ た. ま た,相 対 力価 が 低 くな る に従 い,変 動 係 数 が 大 き くな る傾 向 が 認 め られ た. 風 疹IgG抗
体 陽 性 ・IgM抗
体 陽 性 血 清 は,風 疹
IgG抗 体 陽 性 ・IgM抗 体 陰 性 血 清 に比 し,RP値
の
7)風 疹 感 染 者 血 清 を 用 い た 抗 体 価 の 経 時 的 変 化
低 値 が 見 られ た(Fig.6). 6)HI価
Table2は553例 い,得
症 例(A)は,8歳
の相 対 力 価 区 間 の 換 算(推 定) を用 い てHI法
られ た 相 対 力 価 とHI価
に,相 対 力 価 をHI価
を 比 較 した .さ
行
HI価
ら
体 の 相 対 力 価 で は195日 目 ま で 抗 体 上 昇 が 確 認 さ
区 間 を 推 定 した 結 果 で あ る.HI価8倍 以 下 のす べ て の血 清 は,相 対 力 価0 .001以 下 で あ った.HI
3
Detection
発疹 出現後
2日 ・9日 ・195日に採 血 し,風 疹 抗 体 を 測 定 した.
とELISAを
に 換 算 した 場 合 の 相 対 力 価
Table
の 学 童 児(女)で
of rubella
は,9日
目で ピー クを 示 した が 風 疹IgG抗
れ た. 症 例(B)は,23歳
の 男 性 で 発 疹 出現 後2日
・9
日 ・29日 ・57日 に 採 血 し,同 様 に風 疹 抗 体 を測 定
antibody
in 2 cases with
rubella
Case (A)
Case (B)
# N.D: Not Done 感 染 症学 雑 誌
第66巻
第8号
平行線定量法 による風疹抗体の測定 Table
4
Detection
of rubella
antibody
in 3 cases
1081
after
MMR vaccination
Case (C)
Case (D)
Case (E)
した.HI価
はす べ て256倍 で 抗 体 変 動 は 見 られ な
か った が,相 対 力 価 で表 す と風 疹IgG抗 て 抗 体 価 の 変 動 が 確 認 され た.さ
体 におい
確 立 した.こ の確 立 した 系 に平 行 線 定 量
法 を 用 い て そ の 定 量 性 と特 異 性 に つ い て 検 討 を 行 った.
らに,風 疹IgM
抗 体 の 相 対 力 価 の減 少 傾 向 が 明 らか に観 察 され た
ELISAは,各
種 感 染 症 に お い て 術 式 の標 準 化 が
確 立 され て い るに も か か わ らず,測 定 され た 吸 光
(Table3). 8)MMRワ
ク チ ン接 種 者 血 清 を 用 い た 経 時 的
度 に よ っ て抗 体 価 を表 示 す る方 法 は,再 現 性 や 正 確 性 に関 して 必 ず し も十 分 に 検 討 さ れ て い な い.
変化 症 例(C)・
ELISAを
症 例(D)・
さ らに,ELISAは,測
症 例(E)は,MMRワ
定者あ るいは施設問 に よ
ク チ ン接 種 日か ら抗 体 価 を経 時 的 に追 跡 した 結 果
りぼ らつ きが 多 い こ と,ま た,他
の測 定 方 法 との
で あ る.
比 較 が 困 難 で あ る こ と 等,多
くの 問 題 が あ
風 疹IgG抗
体 と風 疹IgM抗
体 の 抗 体 価 がHI
価 に 比 し,抗 体 量 を よ り明 確 に 反 映 し て い た
平 行 線 定 量 法 に よ って 得 られ る抗 体 価 は標 準 血 清 に 対 す る相 対 力 価 で あ る の で 標 準 化 を 正 確 に
(Table4). 考
行 った 標 準 血 清 を 用 い て 測 定 す る こ とでELISA
察
我 々 は,感 度 ・特 異 性 の面 で よ り精 度 の 高 い風 疹 抗 体 測 定 試 薬 を 作 製 した.風 疹IgG抗 特 異IgG抗
る8)9)15).
体測定 は
体 を測 定 す るペ ル ナ キ シ ダーゼ標識
プ ロ テ インGを
用 い た.風
疹IgM抗
体 測定 には
抗 風 疹 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 を 用 い たIgM捕 平成4年8月20日
捉
に お け る変 動 因 子 を 十 分 に コ ン トロ ール で き る. 平 行 線 定 量 法 は,相 対 力 価 に よ って 表 示 す るた めELISA単
位 に換 算 す る こ とが 容 易 で あ る.そ
の た めELISAに 法 と考 え られ る.
よ る精 度 管 理 に 極 め て 有 用 な 方
森田
1082
マ イ ク ロELISAに 準 血 清(A・B)の
お け る 平 行 線 定 量 法 は,標
す べ て に お い て直 線 性 が認 め ら
れ た.被 検 血 清 につ い て は 風 疹IgG抗 た 被 検 血 清 す べ て 標 準 血 清(A)と 成 立 した.し か し,風 疹IgM抗
体 は,用 い
平行線定量 法が 体 は,抗 体 量 の 違
い に よ っ て 用 量 反 応 回 帰 直 線 のパ タ ー ンが 違 うた め,被 検 血 清 の 希 釈 範 囲 を 高 め に変 更 す る必 要 が
稔他 本 研 究 は千 代 田生命 健 康 開 発事 業 団 に よる社 会 更 生事 業 助 成 の援 助 を受 け て行 わ れ た.ま た,本 論 文 の要 旨の一 部 は,第37回
日本 臨 床病 理 学 会総 会(1990年2月,東
平 行 線定 量 法 の プ ログ ラ ムを供 与 頂 い た 国立 公 衆衛 生 院 北 山秋 雄博 士,千 葉県 衛 生 研究 所 春 日邦子 氏 に感 謝 い た し ます.ま た,MMRワ
クチ ン接 種 血 清 を 分与 頂 い た済 生 会
中央 病 院 中 山哲 夫博 士 に感 謝 いた し ます:
あ った.
文
健 常 人 血 清 に お け るHI価
と吸 光 度 お よ び相 対
1) 吉 田
晃,
力 価 と の比 較 に お い て 良 い 相 関 を示 した.し か し,
野 礼 作:
風 疹IgM抗
IgM抗 331
体 を 含 む 血 清 を 用 い て ス ク リー ニ ン
グ した 結 果,Fig.1よ
り各HI価
を相 対 力 価 で 表
す 相 対 力 価 区 間 よ り明 ら か に 外 れ る 血 清 が あ っ た.こ
の 血 清 の 多 くは,低 い 相 対 力 価 を 示 し て い
た.
有 無 を確 認 す る必 要 が あ る と思 わ れ る. また,同 は,と
よ りバ ラ ッ キ の 小 さ い 結 果 が 得 られ た.各
市販
薬 の違 い や ロ ッ ト間 の 誤 差 お よ び 検 査
施 設 問 の 測 定 誤 差 等 か ら生 じ る問 題 は,標 準 管 理 血 清 の 統 一 お よび 吸 光 度 か ら相 対 力 価 へ 表 示 す る こ とでELISAの
精 度 管 理 に極 め て有 用 で あ る と
考 え られ る. 今 回,自 家 製 の 標 準 血 清 を 使 用 した が,早 急 に 公 的 機 関 に よ っ て標 準 管 理 血 清 の 標 準 品 が 確 立 さ れ,全
国 の 検 査 施 設 に お い て使 用 され る こ とを 期
待 した い. ELISAに
よ る風 疹 感 染 者 とMMRワ
ク チ ン接
種 者 血 清 の 経 時 的 変 化 に お い て 風 疹IgG抗 風 疹IgM抗
体 と
体 の相 対 力 価 は,抗 体 価 の 推 移 を よ り
尚: 545-550,
38:
1171-1179,
1989.
1990. 高 木 謙 二,
北 山 秋 雄,
矢 崎 廣 久,
堀
によ る
感 染 症 誌,
64:
1990.
pretation of spectrophotometric absorbance values to define result of enzyme-linked immunosorbent assay. J. Clin. Microbiol., 11: 398 401, 1980. 8) Malvano, R., Bonioro, A., Dovis, M. & Zannino, M.: ELISA for antibody measurement: Aspects related to data expression. J. Immunol. Method, 48: 51-60, 1982. 9) Melville-Smith, M. E., Seagroatt, V.A. & Watkins, J. T.: A comparison of enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) with the toxin neutralization test in mice as a method for the estimation of tetanus antitoxin in human sera. J. Biol. Stand., 11: 137-144, 1983. 10)
森 田
ELISA法 て. 11)
動 を よ り明確 に反 映 す る こ とが 示 唆 され た.
風 疹 抗体 検 査 の
6) DeSavigny, D. & Voller, A.: The communication of ELISA data from labolatory to clinician. J. Immunol. Assay. 1 : 105-128, 1980. 7) Heck, F. C., Williams, J. D. & Pruett, J.: Inter-
体 の み な らず
よ り,抗 体 量 の 変
矢 吹 朗 彦:
平 行 線 定 量 法 を 用 い たELISA法
稔,
鈴 木 達 夫,
Protein-Gと
に よ る抗 体 価 の 定 量 は,風 疹IgG抗
甲
産 婦 人 科 の 立 場 か ら . 臨 床 と ウ イ ル ス,
内 村 真 佐 子,
967-972,
この こ と か ら平 行 線 定 量 法 を 応 用 したELISA
体 に お い て もHI価
朝 本 明 宏,
人 血 清 中 ジ フ テ リア 抗 体 の 測 定.
良 く反 映 して い た.
風 疹IgM抗
川名
内 善 信:
もに バ ラ ツキ の 小 さ い結 果 が 得 られ た .日
ELISA試
勉,
18:
時 再 現 性 の 検 討 で は相 対 力 価 と吸 光 度
に ノミラ ツキ が み られ た が,相 対 力 価 で 表 す こ とに
畠 野 靖 子,
に よる風 疹 ウ イル ス
, 1984.
産 婦 人 科 の 実 際, 4)
5)
差 再 現 性 は,吸 光 度 で表 す と標 準 偏 差 と変 動 係 数
引 地 一 昌,
捉ELISA法
問 題 点 と商 業 検 査 機 関 の 現 状 医 療 に お け る 意 義.
よ っ て 相 対 力 価 区 間 を 明 確 に し,そ の 区 間 か ら外 体の
IgM捕
2) Wielaard, F., Denissen, A., Van Elleswijk, J. & Van Gemert, G.: Clinical validation of an antibody-capture anti-rubella IgM-ELISA. J. Virol. Method., 10: 349-354, 1985.
準管 理 血清 の統一 を行 うこ とに
れ た り,疑 わ しい検 体 につ い て は 風 疹IgM抗
献
槻 舘 由 美 子,
体 の 測 定 に つ い て.臨 床 と ウ イ ル ス, 12: 28
3) 千 場
す な わ ち,標
京)に
お いて 発表 した.
鈴 木 雄 次 郎,
小 松 治 子:
モ ノ ク ロ ーナ ル 抗 体 を 用 い た に よ る風 疹 ウ イ ル ス抗 体 の測 定 につ い
臨 床 と ウ イ ル ス,
厚 生 省 監 修:
19: 135-142,
微 生 物 検 査 必 携.
チ ア 検 査. 第2版,(日 -356 , 1978.
1990.
ウ イ ル ス ・ リケ ッ
本 公 衆 衛 生 協 会 編), p.351
感 染 症 学 雑誌
第66巻
第8号
平行線定量法 による風疹抗体の測定 12)
北 山 秋 雄, 内 村 真 佐 子, 市 村
博, 大 田 原 美 作 雄:
パ ー ソ ナ ル コ ン ピ ュ ー タ を 用 い たELISA法 体 価 処 理 ・解 析 シ ス テ ム の 開 発 に つ い て.
13)
衛 研 報 告,
12: 41-44,
北 山 秋 雄,
春 日邦 子,
時 枝 正 吉,
臨 床 と ウ イ ル ス,
平 行 線定 量 15:
369-372,
1987. 14)
北 山 秋 雄,
Microtiter
春 日邦 子,
十 川 知 子,
Enzyme-Linked
時 枝 正 吉,
by
平 行 線定 量 を 用 い
17: 411-414,
臨床 とウ
1989.
市村
Immunosorbent
―Analysis
宗:
15) Sedgwik, A. K., Ballow, M., Spanks, K. & Yilton, C.: Rapid quantitative microenzymelinked immunosorbent assay for tetanus antibodies. J. Clin. Microbiol., 18: 104-109, 1983.
市村
マ イ ク ロELISA法
に よ る ム ン プ ス 抗 体 測 定:-第1報.
平 山
に よ る ム ン プ ス 抗 体 瀬 定.-第2報.
相 対 力 価 と 中 和 抗 体 価 の 比 較 ・検 討-.
千葉県
イ ル ス,
十 川 知 子, 宗:
大 田 原 美 作 雄,
たELISA法
1988.
博, 大 田 原 美 作 雄, 平 山
法 の 有 効 性-.
博,
の抗
1083
Parallel
Assay Line
for Rubella Assay
Antibodies
in Human
Sera
Method―
Minoru MORITA & Tatsuo SUZUKI Departmentof BiomedicalLaboratory,The KitasatoInstituteHospital Yujiro SUZUKI Departmentof Virology,The KitasatoInstitute Hiroo HOSHINO Departmentof Hygiene,GunmaUniversitySchoolof Medicine Antibodies against rubella virus in human sera were measured by ELISA and antibody titers were calculated by the parallel line assay method. The dose response regression curves of standard sera and test sera containing IgG antibody calculated by the parallel line assay method showed linearity, and were parallel to one another. However, the regression lines of sera positive for IgM antibody against rubella virus were not parallel to one another in the low dilution region, but parallel in the higher dilution region. A good correlation was observed between the rubella IgG antibody titers measured by the hemagglutination-inhibition (HI) test and those calculated by the parallel line assay method. The coefficient of the correlation was 0.781. Time-course studies of IgG or IgM antibody titers against rubella virus in rubella patients or in vaccines with MMR vaccine indicated that the ELISA was more precise and specific method than the HI test. Thus, the parallel line assay method using ELISA is considered to be a more useful method for the detection and quantification of antibodies to rubella than the conventional HI test.
平 成4年8月20日