Acta haemat. 54: 98-105 (1975)
L’agrégation des plaquettes à l’ADP: Etude par diffusion de la lumière1 J. F. Stoltz et J. F. Batoz Centre régional de transfusion sanguine et d’hématologie, Nancy
Key Words. ADP • Light absorption • Light scattering ■Nephelometry • Platelet aggregation • Platelet shape • Thrombocytes Abstract. The absorption and the ADP-induced platelet aggregation have been studied by the technique of light scattering. The results show, that the platelets have no specific absorption and that the aggregation test measures predominantly the diminution of free platelets. The determination of platelet kinetics and shape changes is not specific.
L’étude de l’agrégation plaquettaire est généralement approchée, de puis plusieurs années, à l’aide de la technique photométrique proposée par B orn [1]. Cette méthode consiste à étudier les variations de turbidité d’un plasma riche en plaquettes (PRP) au cours de l’agrégation. Une modification récente proposée par M ichal [10] a permis d’étudier les variations de lumière diffusée à 90°. Partant d’un travail précédent [12] où nous avions envisagé le calcul du volume diffusant des plaquettes, notre objectif est de dégager les dif férents paramètres qui interviennent dans la méthode néphélométrique classique, afin de préciser les phénomènes mesurés et la signification qu’il faut attribuer aux courbes enregistrées. C’est pourquoi nous avons étudié d’une part, l’absorption propre des plaquettes comparée au plas ma et, d’autre part, les variations d’intensité lumineuse diffusée à un an gle donné, ou transmises par un PRP au cours de l’agrégation à l’ADP.
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1 Ce travail a été réalisé avec l’aide de la DRME (Section Biologie), Contrat no. 74.34.202.00.480.75.01.
Stoltz /B atoz
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Méthode Rappels théoriques concernant la néphétométrie. La turbidité spécifique d'une soiution est définie comme le logarithme du rapport des intensités lumineuses inci dentes et transmises, rapporté à l’unité de longueur de solution traversée. Cette turbidité a principalement deux causes: 1) l’absorption propre (et généralement sélective) des molécules ou particules en suspension (solutions colorées); 2) la dis sipation de lumière par effets de diffusion ou de fluorescence dans d'autres direc tions que celle de la lumière incidente (solutions troubles). Les deux phénomènes interviennent simultanément, mais dans la pratique, on distingue deux cas extrêmes: 1) les particules ou molécules présentent une absorp tion propre notable et sont suffisamment petites pour que la lumière diffusée soit négligeable. La loi de Beer-Lambert s'applique alors et la turbidité est proportion nelle à la concentration; 2) les particules ne présentent pas d’absorption propre importante et sont d'assez grande dimension. Seul intervient, dans ce cas, l’effet dû à la diffusion: en effet, la somme de toute l’intensité diffusée à angle non nul et de l'intensité lumineuse transmise est égale, en l’absence de fluorescence, à l’in tensité incidente. Il n'y a donc pas de différence fondamentale entre l’étude de la turbidité ou de la diffusion et les calculs présentés par Debye [5] et Doty et Steiner |6), portant sur l’étude de la turbidité de solutions de macromolécules, montrent que les me sures de turbidité permettent d’atteindre les mêmes paramètres que les études de diffusion et que les équations sont similaires. Matériel. Nous avons utilisé un photogoniodiffusomètre Fica 50 qui a été décrit par ailleurs [12]. Les mesures d’absorption ont été faites à l’aide d'un spectrophotomètre Beckmann entre 0,3 et 0,7 //m. Le sang nécessaire à la préparation des PRP a été recueilli en verrerie siliconée sur citrate ou sur EDTA. Les PRP étaient préparés par centrifugation lente du sang total à 18 °C. Le plasma pauvre en plaquettes (PPP) était obtenu par centrifugation rapide du PRP. L’ADP provenait des laboratoires Sigma. Méthode. Notre étude expérimentale comporte trois parties: 1) l'étude de l'ab sorption propre du PRP et des plaquettes; 2) l’étude de l’agrégation à l’ADP et 3) l’influence de l’ADP sur le PRP recueilli sur EDTA. Les mesures ont été effectuées à 37 °C. L’ADP était ajouté à la pipette de fa çon à éviter les turbulences. L’ADP était préparé en solution aqueuse isotonique à une concentration telle que l’addition d’ADP représente 2,5%> en volume du volume total du PRP placé dans la cellule. Ceci, afin de négliger l'effet de la dilution. Les doses utilisées ont varié de 0,5 à 2 «g/ml.
Etude de l’absorption propre du PRP citraté. Les courbes d’absorp tion pour le PRP et le PPP sont résumées sur la figure 1 (comparée au
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Résultats
100
Stoltz /B atoz
solvant, c’est-à-dire à l’eau). Il apparaît que le PPP présente une ab sorption propre importante vers 0,45 /
L’agrégation des plaquettes à l’ADP: Etude par diffusion de la lumière1 J. F. Stoltz et J. F. Batoz Centre régional de transfusion sanguine et d’hématologie, Nancy
Key Words. ADP • Light absorption • Light scattering ■Nephelometry • Platelet aggregation • Platelet shape • Thrombocytes Abstract. The absorption and the ADP-induced platelet aggregation have been studied by the technique of light scattering. The results show, that the platelets have no specific absorption and that the aggregation test measures predominantly the diminution of free platelets. The determination of platelet kinetics and shape changes is not specific.
L’étude de l’agrégation plaquettaire est généralement approchée, de puis plusieurs années, à l’aide de la technique photométrique proposée par B orn [1]. Cette méthode consiste à étudier les variations de turbidité d’un plasma riche en plaquettes (PRP) au cours de l’agrégation. Une modification récente proposée par M ichal [10] a permis d’étudier les variations de lumière diffusée à 90°. Partant d’un travail précédent [12] où nous avions envisagé le calcul du volume diffusant des plaquettes, notre objectif est de dégager les dif férents paramètres qui interviennent dans la méthode néphélométrique classique, afin de préciser les phénomènes mesurés et la signification qu’il faut attribuer aux courbes enregistrées. C’est pourquoi nous avons étudié d’une part, l’absorption propre des plaquettes comparée au plas ma et, d’autre part, les variations d’intensité lumineuse diffusée à un an gle donné, ou transmises par un PRP au cours de l’agrégation à l’ADP.
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1 Ce travail a été réalisé avec l’aide de la DRME (Section Biologie), Contrat no. 74.34.202.00.480.75.01.
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Méthode Rappels théoriques concernant la néphétométrie. La turbidité spécifique d'une soiution est définie comme le logarithme du rapport des intensités lumineuses inci dentes et transmises, rapporté à l’unité de longueur de solution traversée. Cette turbidité a principalement deux causes: 1) l’absorption propre (et généralement sélective) des molécules ou particules en suspension (solutions colorées); 2) la dis sipation de lumière par effets de diffusion ou de fluorescence dans d'autres direc tions que celle de la lumière incidente (solutions troubles). Les deux phénomènes interviennent simultanément, mais dans la pratique, on distingue deux cas extrêmes: 1) les particules ou molécules présentent une absorp tion propre notable et sont suffisamment petites pour que la lumière diffusée soit négligeable. La loi de Beer-Lambert s'applique alors et la turbidité est proportion nelle à la concentration; 2) les particules ne présentent pas d’absorption propre importante et sont d'assez grande dimension. Seul intervient, dans ce cas, l’effet dû à la diffusion: en effet, la somme de toute l’intensité diffusée à angle non nul et de l'intensité lumineuse transmise est égale, en l’absence de fluorescence, à l’in tensité incidente. Il n'y a donc pas de différence fondamentale entre l’étude de la turbidité ou de la diffusion et les calculs présentés par Debye [5] et Doty et Steiner |6), portant sur l’étude de la turbidité de solutions de macromolécules, montrent que les me sures de turbidité permettent d’atteindre les mêmes paramètres que les études de diffusion et que les équations sont similaires. Matériel. Nous avons utilisé un photogoniodiffusomètre Fica 50 qui a été décrit par ailleurs [12]. Les mesures d’absorption ont été faites à l’aide d'un spectrophotomètre Beckmann entre 0,3 et 0,7 //m. Le sang nécessaire à la préparation des PRP a été recueilli en verrerie siliconée sur citrate ou sur EDTA. Les PRP étaient préparés par centrifugation lente du sang total à 18 °C. Le plasma pauvre en plaquettes (PPP) était obtenu par centrifugation rapide du PRP. L’ADP provenait des laboratoires Sigma. Méthode. Notre étude expérimentale comporte trois parties: 1) l'étude de l'ab sorption propre du PRP et des plaquettes; 2) l’étude de l’agrégation à l’ADP et 3) l’influence de l’ADP sur le PRP recueilli sur EDTA. Les mesures ont été effectuées à 37 °C. L’ADP était ajouté à la pipette de fa çon à éviter les turbulences. L’ADP était préparé en solution aqueuse isotonique à une concentration telle que l’addition d’ADP représente 2,5%> en volume du volume total du PRP placé dans la cellule. Ceci, afin de négliger l'effet de la dilution. Les doses utilisées ont varié de 0,5 à 2 «g/ml.
Etude de l’absorption propre du PRP citraté. Les courbes d’absorp tion pour le PRP et le PPP sont résumées sur la figure 1 (comparée au
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solvant, c’est-à-dire à l’eau). Il apparaît que le PPP présente une ab sorption propre importante vers 0,45 /
