Journal of Chromatography, 136 (1977) 186488 0 Elsevier Scientic Publishing Company, Amsterdam -
Printed in The Netherlands
CHROM. 9985
Note
biinnschichtchromatographische s%wen KARL
BACH und HERMANN
Spaltung
JOSEF
der
Racemate
einiger
Amino-
HAAS
Fachbereich 3 der Universkit des Saarfandq Saar (3.R.D.j
Fachrichtmg P&iologische
Chcn:ie, D-66.50 Honzburg[
(Eingegangen am 22. Dezember 1976)
Papierchromatographische Auftrennungen racemischer a-AminosHuren wurden verhaltnismassig hatig beschrieben I. Auch die Racemate einiger Diaminodicarbonsiuren wurden papierchromato’graphisch gespalten’. Diinnschichtchromatographisch wurden b&her nur die Racemate von Tryptophan, 5- und 6-Hydroxytryptophan3 sowie von a,&Diaminoadipins&tre und CL,&Diaminopimelinsaure4 aufgetrennt, wobei Cellulose als stationzre Phase und n-ButanolPyridin-Wasser (1 :l :l) hzw. Methanol-Wasser-Essigsgure (40:10:2) als mobile Phase’dienten. Wir haben versucht, die Racemate weiterer Aminosiiuren diinnschichtchromatographisch aufzutrennen. IMATERIAL
UND METHODIK
Diinnschichtfolien Am besten eigneten sich DC-Alufolien
(E. Merck, Darmstadt, B.R.D.). . .F
Cellulose Fzs4, Schichtdicke 0.1 mm
..
Entwickhng
Aufgetragen wurden 3 pg der sulfonierten Aminos&uen (Tabelle I, Nr. 2, 7 und 8), von den Gbrigen Aminosluren jeweils 0.5-l pg. AIs mobile Phase diente eines den Laufmittel A bis F: A, Methanol p-a.-Wasser (3:l); B, Methanol p-a.Wasser (7~3); C, Methanol p-a.-Wasser (3:2); D, Methanol p.a.-Wasser (1:l); E, n-Butanol-Eisessig-Wasser (1: 1 :l) ; F, Athanoi abs.-Wasser (4 : 1). Laufstrecke : 15 cm. Spriihreagenz
Als Spriihreagenz wurde 0.3 g Ninhydrin in 100 ml n-Butanol f verwendet5.
3 ml Eisessig
Detektion
Die getrockneten Folien wurden bespriiht und co. 5 min auf 110” erhitzt. Tryptophan, 5-Hydroxytryptophan und &Benzoyl-a-alanin waren such aufgrund
NOTES
. 187
von Muoreszenzli%chung (254 mn), Kynurenin war such durch Eigenfluoreszenz (366 nm) erkennbar. ERGEBNISSE UND DISKUSSION
Die Ergebnisse gehen aus Tabelle I hervor. Wghrend es uns bisher nicht gelang, D,L-Phenylalanin diinnschichtchromatographisch aufzutrennen, haben die Dund die L-Formen einiger Derivate deutlich unterschiedliche &-Werte, wobei die L-Formen langsamer als die D-Forrnen wandern. Besonders gute Trennungen sind im Falle der p-Tyrosin-3-sulfons8ure
RF-Werte zukommen.
D,L-Kynurenin ist ebenfalls aufzutrennen, allerdings 1Suft bei dieser Aminosaure die ~-Form langsamer als das L-Enantiomere. Wegen der strukturellen Verwandtschaft mit Kynurenin ist denkbar, dass such im FalIe des p-Benzoyl-a-alanins der D-Form der kleinere R,-Wert zuzuschreiben ist. Die geschilderten diinnschichtchromatographischen Auftrennungen haben im Vergleich zu papierchromatographischen Methoden den Vorteil, dass man mit wesentlich kiirzeren Laufzeiten, ohne Durchlaufchromatographie sowie in der Regel ohne Mehrfachentwicklungen auskommt. Al-
TABELLE I R,WERTE
EINIGER D,L-AMINOS;iUREN
Aminostiwe
p-Amino-phenylalanin A Phenylalanitvl-sulfonslure E’ o-Tyrosin B nr-Tyrosin B B’ p-Tyrosin 3,4-Dihydroxy-phenylalanin C p-Tyrosin-3-sulfons%ure B p-Tyrosin-3-sulfonsHure E rlrreo-p-(3,4-Dihydroxy-phenyl)-serin D’ Tryptophan C C S-Hydroxytryptophan F’ /?-Benzoyl-a-alanin C Kynurenin B’ a,&-Diaminopimelintiure * Doppelentwicklung. ** RpWerte nicht sicher der D- bzw.
II0
270 130 130 130 145 130 285 155 145 145 195 145 130
L-
74 83 57 73 44 52 41
45,40 73,70 61, 57 59, 55 83,81 57,53 73, 63 44,30 67, 65” 52,46 41,34 59, 62” 38,47 45, 39, 34”
bzw. meso-Form zuzuordnen.
40
71
0.96
81 53 63 30
0.97 0.93 0.86 0.68
46 34
‘o.ss 0.83
47
NOTES
138
lerdings geIang es bisher nicht, D,L-Histidin, das papierchromatographisch aufzutrennen istl, durch Diinnschichtchromatographie in die Antipoden zu spahen. An der a-Aminogruppe beispielsweise durch eine Dansyl- oder eine Carbobenzoxygruppe substituierte D,L-Aminosauren sind weder papierchromatographisch’ noch diinnschichtchromatographisch spaltbar. DANK
Wir danken dem Fonds der Chemischen Industrie fiir eine Sachbeihilfe. LLTERATIJR 1 R. Weichert, Ark. Ken& 31 (1970) 517; dort weitere Literatur. 2 C. L. de Ligny, H. Nieboer, J. J. M. de Vijlder and J. H. H. G. van Willigen, Rec. T&v. Chinz., 82 (1953) 213; dart weitere Literatur. 3 S. F. Contractor and J. Wragg, Nature (London), 208 (1965) 71. 4 A. Chimiak and J. Polofski, J. Chromatogr., 115 (1975) 635. 5 Anfirbereagenzien fik Diknschicht- und Papierchromatographie, E. Merck, Darmstadt, 1970, S. 75, Nr. 231 A.
Printed in The Netherlands
CHROM. 9985
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biinnschichtchromatographische s%wen KARL
BACH und HERMANN
Spaltung
JOSEF
der
Racemate
einiger
Amino-
HAAS
Fachbereich 3 der Universkit des Saarfandq Saar (3.R.D.j
Fachrichtmg P&iologische
Chcn:ie, D-66.50 Honzburg[
(Eingegangen am 22. Dezember 1976)
Papierchromatographische Auftrennungen racemischer a-AminosHuren wurden verhaltnismassig hatig beschrieben I. Auch die Racemate einiger Diaminodicarbonsiuren wurden papierchromato’graphisch gespalten’. Diinnschichtchromatographisch wurden b&her nur die Racemate von Tryptophan, 5- und 6-Hydroxytryptophan3 sowie von a,&Diaminoadipins&tre und CL,&Diaminopimelinsaure4 aufgetrennt, wobei Cellulose als stationzre Phase und n-ButanolPyridin-Wasser (1 :l :l) hzw. Methanol-Wasser-Essigsgure (40:10:2) als mobile Phase’dienten. Wir haben versucht, die Racemate weiterer Aminosiiuren diinnschichtchromatographisch aufzutrennen. IMATERIAL
UND METHODIK
Diinnschichtfolien Am besten eigneten sich DC-Alufolien
(E. Merck, Darmstadt, B.R.D.). . .F
Cellulose Fzs4, Schichtdicke 0.1 mm
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Entwickhng
Aufgetragen wurden 3 pg der sulfonierten Aminos&uen (Tabelle I, Nr. 2, 7 und 8), von den Gbrigen Aminosluren jeweils 0.5-l pg. AIs mobile Phase diente eines den Laufmittel A bis F: A, Methanol p-a.-Wasser (3:l); B, Methanol p-a.Wasser (7~3); C, Methanol p-a.-Wasser (3:2); D, Methanol p.a.-Wasser (1:l); E, n-Butanol-Eisessig-Wasser (1: 1 :l) ; F, Athanoi abs.-Wasser (4 : 1). Laufstrecke : 15 cm. Spriihreagenz
Als Spriihreagenz wurde 0.3 g Ninhydrin in 100 ml n-Butanol f verwendet5.
3 ml Eisessig
Detektion
Die getrockneten Folien wurden bespriiht und co. 5 min auf 110” erhitzt. Tryptophan, 5-Hydroxytryptophan und &Benzoyl-a-alanin waren such aufgrund
NOTES
. 187
von Muoreszenzli%chung (254 mn), Kynurenin war such durch Eigenfluoreszenz (366 nm) erkennbar. ERGEBNISSE UND DISKUSSION
Die Ergebnisse gehen aus Tabelle I hervor. Wghrend es uns bisher nicht gelang, D,L-Phenylalanin diinnschichtchromatographisch aufzutrennen, haben die Dund die L-Formen einiger Derivate deutlich unterschiedliche &-Werte, wobei die L-Formen langsamer als die D-Forrnen wandern. Besonders gute Trennungen sind im Falle der p-Tyrosin-3-sulfons8ure
RF-Werte zukommen.
D,L-Kynurenin ist ebenfalls aufzutrennen, allerdings 1Suft bei dieser Aminosaure die ~-Form langsamer als das L-Enantiomere. Wegen der strukturellen Verwandtschaft mit Kynurenin ist denkbar, dass such im FalIe des p-Benzoyl-a-alanins der D-Form der kleinere R,-Wert zuzuschreiben ist. Die geschilderten diinnschichtchromatographischen Auftrennungen haben im Vergleich zu papierchromatographischen Methoden den Vorteil, dass man mit wesentlich kiirzeren Laufzeiten, ohne Durchlaufchromatographie sowie in der Regel ohne Mehrfachentwicklungen auskommt. Al-
TABELLE I R,WERTE
EINIGER D,L-AMINOS;iUREN
Aminostiwe
p-Amino-phenylalanin A Phenylalanitvl-sulfonslure E’ o-Tyrosin B nr-Tyrosin B B’ p-Tyrosin 3,4-Dihydroxy-phenylalanin C p-Tyrosin-3-sulfons%ure B p-Tyrosin-3-sulfonsHure E rlrreo-p-(3,4-Dihydroxy-phenyl)-serin D’ Tryptophan C C S-Hydroxytryptophan F’ /?-Benzoyl-a-alanin C Kynurenin B’ a,&-Diaminopimelintiure * Doppelentwicklung. ** RpWerte nicht sicher der D- bzw.
II0
270 130 130 130 145 130 285 155 145 145 195 145 130
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74 83 57 73 44 52 41
45,40 73,70 61, 57 59, 55 83,81 57,53 73, 63 44,30 67, 65” 52,46 41,34 59, 62” 38,47 45, 39, 34”
bzw. meso-Form zuzuordnen.
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0.96
81 53 63 30
0.97 0.93 0.86 0.68
46 34
‘o.ss 0.83
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138
lerdings geIang es bisher nicht, D,L-Histidin, das papierchromatographisch aufzutrennen istl, durch Diinnschichtchromatographie in die Antipoden zu spahen. An der a-Aminogruppe beispielsweise durch eine Dansyl- oder eine Carbobenzoxygruppe substituierte D,L-Aminosauren sind weder papierchromatographisch’ noch diinnschichtchromatographisch spaltbar. DANK
Wir danken dem Fonds der Chemischen Industrie fiir eine Sachbeihilfe. LLTERATIJR 1 R. Weichert, Ark. Ken& 31 (1970) 517; dort weitere Literatur. 2 C. L. de Ligny, H. Nieboer, J. J. M. de Vijlder and J. H. H. G. van Willigen, Rec. T&v. Chinz., 82 (1953) 213; dart weitere Literatur. 3 S. F. Contractor and J. Wragg, Nature (London), 208 (1965) 71. 4 A. Chimiak and J. Polofski, J. Chromatogr., 115 (1975) 635. 5 Anfirbereagenzien fik Diknschicht- und Papierchromatographie, E. Merck, Darmstadt, 1970, S. 75, Nr. 231 A.
